梅毒の分析は、最も一般的な臨床検査の1つです。 梅毒の検査は予防検査で広く使われています。 顕微鏡検査は梅毒の原因物質を明らかにします-。 血清学的反応の助けを借りて、梅毒の診断が確認され、潜在性梅毒の診断が確立され、治療の有効性が監視され、患者の治癒が決定されます。

梅毒の診断は、臨床データ、材料サンプル中の梅毒の原因物質の検出、および血清学的研究方法による診断の確認に基づいて確立されます。 梅毒の症状は非常に多く、多様です。そのため、この病気はさまざまな専門の医師によって検出されます。 原発性梅毒の鑑別診断は、多くの病気で行われます。

米。 1.写真では、梅毒の主な症状は下疳です。

梅毒トレポネーマに対する抗体と血清学的診断

梅毒に感染すると、患者の体内で抗体が形成されます。 血清学的診断は、梅毒患者の体内での梅毒の初期段階、治療期間中、および治療終了後の抗体形成のダイナミクスを研究して、病気の再発の問題を解決するのに役立ちます。患者または再感染（再感染）において、大量の病状の下で梅毒を診断するため。

梅毒トレポネーマIgMに対する抗体

IgM抗体は、感染後に最初に産生されます。 それらは、感染後2週間目から血清学的反応を使用して検出され始めます。 6〜9週間の病気で、その数は最大になります。 患者が治療を受けていない場合、抗体は6か月後に消えます。 IgM抗体は1〜2か月後に消えます。 後、3〜6か月後。 -後期梅毒の治療後。 それらの成長が記録されている場合、これは再感染に役立つか、それについて語っています。 IgM分子は大きく、胎盤を通過して胎児に到達することはありません。

梅毒トレポネーマIgGに対する抗体

抗体IgG免疫グロブリンは、感染の瞬間から最初の月の終わり（4週目）に現れます。 それらの力価はIgMの力価よりも高い。 IgGは硬化後も長期間持続します。

非特異的抗体

多くの血清学的反応があります。 これは、抗原性の複数の淡いトレポネーマによるものです。 病人の血清中 さまざまな段階梅毒は、特定の抗体に加えて、特定の非特異的抗体（凝集素、補体結合、イモビリシン、免疫蛍光を引き起こす抗体、沈降素などの反応（DAC））を形成します。

梅毒の偽陽性検査

特徴的な機能非トレポネマルテストは、偽陽性反応の受信です。 カルジオリピン抗原に対してヒトの血液で産生される抗体-領域は、梅毒だけでなく、他の疾患（コラーゲン症、肝炎、腎臓病、甲状腺中毒症、癌、感染症（らい、結核、ブルセロシス、マラリア、 、緋色の熱）、妊娠中および月経中、脂肪分の多い食品やアルコールを食べるとき。 偽陽性反応の数は年齢とともに増加することに注意してください。

米。 2.写真は女性の原発性梅毒を示しています。

血清学的検査を用いた梅毒の検査室診断

梅毒の血清学的検査は、トレポネーマと非トレポネーマに分類されます。

1.非トレポネマルテスト

カルジオリピン抗原は、このグループのテストで抗原として使用されます。 梅毒の原因物質の脂質抗原が最も多い。 それらは細胞の乾燥質量の1/3を構成します。 非トレポネマルテストは、カルジオリピン抗原に対して産生されるリーギン抗体を検出します。 このグループには、補体結合反応（RSCcard）、微小沈殿反応（RMP）、血漿レアギンの迅速測定（RPR）などが含まれます。これらのテストを使用して、治療の有効性を監視できます。 非トレポネマルテストからの陽性結果は、トレポネマルテストによって確認する必要があります。 非トレポネマルテストの際立った特徴は、偽陽性反応の受信です。

2.トレポネマルテスト

トレポネーマ検査では、淡いトレポネーマの培養物から分離されたトレポネーマ由来の抗原を使用します。 彼らの助けを借りて、非トレポネマルテストの肯定的な結果が確認されています。 このグループには、RSCtrep-補体結合の反応、RIF-免疫蛍光とその修飾の反応、RIT、RIBT-淡いトレポネーマの固定化の反応、RPHA-受動的血球凝集の反応、ELISA-酵素結合免疫吸着測定法が含まれます。

3.組換え抗原を使用した梅毒の検査

このグループのテスト用の抗原は、遺伝子操作され、反応（RPHAおよびELISA、イムノブロッティング（IB）分析およびイムノクロマトグラフィー分析）で使用されます。

米。 3.梅毒の診断には、一連の血清学的検査が使用されます。

非トレポネマルテストを使用した梅毒の診断

梅毒を検出するために、非トレポネマル検査または血清学的検査の複合体（CSR）が使用されます。 血清学的診断は、感染の瞬間から5週目から、または出現後2〜3週間から適用されます。 抗体は、新鮮な原発性のほぼすべての患者で検出されます。 血清学的反応は、三次潜伏性梅毒の患者の70〜80％、50〜60％の症例で陽性です。

非トレポネマル検査を使用した血清学的検査は、偽陽性の結果をもたらす可能性があります。

米。 4.梅毒を検査するための採血。

補体結合反応（CSCカード、CAを使用したCSC、ワッセルマン反応）

100年以上前にA.ワッセルマンによって発明されたワッセルマン反応（RW、RV）は、今日多くの変化を遂げましたが、伝統への賛辞として、現在までその名前を保持しています。 カルジオリピン抗原を使用した補体結合反応は、抗体の検出を目的としているだけでなく、血清のさまざまな希釈度を使用して定量的な形で実行されるため、治療の有効性を監視するために使用できます。 感度と特異性が低く、偽陽性の結果が得られることは、このタイプの研究の否定的な側面です。

ワッセルマン反応の本質は次のとおりです。ヒトの血液中に梅毒の原因物質に対する抗体が存在する場合、ワッセルマン反応をステージングするときに使用される抗原は、褒め言葉と沈殿物を介してそれらに結合します。 反応の強さは（+）記号で示されます。 反応は負（-）である可能性があります-沈殿物なし、疑わしい（沈殿物が少ないまたは+）、わずかに正（++）、正（+++）、および急激に正（++++）。

より敏感なのは、修正されたワッセルマン反応、つまりコルマー反応です。 その助けを借りて、抗体は血清中で検出され、ワッセルマン反応は否定的な結果をもたらしました。

鋭い陽性反応の場合、血清を1:10から1：320に希釈して使用するリーギンの定量分析が行われ、このタイプの研究を使用して治療の有効性を監視することができます。 たとえば、抗体の力価の低下とそれに続く血清陰性（陰性の結果が得られる）は、疾患の治癒が成功したことを示します。

米。 5.梅毒の血液検査-ワッセルマン反応。

沈殿マイクロリアクション（MPR）

降水の微小反応は、集団の特定のグループの集団検査、梅毒の診断、および治療の有効性の監視に使用されます。 この種の研究を行うためには、 少量調査した資料。 沈殿の微小反応は、免疫学的抗原抗体反応に基づいています。 対象の血清中に抗体が存在する場合、抗原-抗体複合体が沈殿してフレークを形成する。 反応は特別なガラスプレートのウェルで行われます。 これは、ワッセルマン反応として、沈殿物の強度と（+）のフレークのサイズによって推定されます。 妊娠中の女性、ドナーを検査し、治療の有効性を監視する場合、それは使用されません。 VDRLとRPRは、マイクロリアクションの一種です。

米。 6.ガラス上の液滴における沈殿反応のタイプ。

米。 7.梅毒の血液検査-微小沈殿反応。

米。 8.血漿レアギンの迅速な測定のためのキット（RPR梅毒検査）。

非特異的な血清学的反応中に得られたすべての陽性検査は、特定の反応による確認を必要とします-トレポネマル検査。

トレポネマルテストを使用した梅毒の診断

トレポネーマ検査を行う際には、トレポネーマ由来の抗原を使用します。 それらのマイナス面は、治療の有効性を制御するためにそれらを使用することが不可能であり、スピロケトーシスおよび非性感染症で陽性の結果を取得し、 腫瘍性疾患、ハンセン病、いくつかの内分泌病理学。 RPHA、ELISA、RIFなどの検査は、梅毒が治癒した後も何年もの間、場合によっては生涯にわたって陽性のままです。

RIBTとRIFは、梅毒の診断に使用されるすべての血清学的検査の中でより具体的です。 それらは、偽陽性反応を区別し、陰性反応で発生する梅毒の後期型を特定することを可能にします。 RIBTの助けを借りて、子供の感染の問題を解決する必要がある場合、偽陽性反応が妊婦に認識されます。

淡いトレポネーマの固定化の反応（RIBT、RIT）

反応の本質は、患者の血清中の抗体が淡いトレポネーマを固定化することです。 病原体の最大20％が固定化された場合、陰性反応が考慮されます。弱い陽性は21〜50％、陽性は50〜100％です。 RIBTは時々偽陽性の結果を出します。 テストは複雑で時間がかかりますが、実施する際にはかけがえのないものです 鑑別診断妊娠中の女性を含む、病気の潜在的な形態と血清学的反応の偽陽性の結果。 RIBTは、二次梅毒、初期梅毒、後期梅毒で100％陽性の結果を示し、94例では100％の症例で、他の形態の梅毒でも陽性の結果を示します。

免疫蛍光反応（RIF）

反応の本質は、淡いトレポネーマ（抗原）が蛍光色素で標識された抗体と組み合わされて、発光顕微鏡で黄緑色の輝きを放つことです。 結果は（+）記号で評価されます。 RIFの助けを借りて、クラスA免疫グロブリンが検出されます。免疫蛍光反応はワッセルマン反応よりも早く陽性になります。 続発性および潜伏性梅毒では常に陽性であり、95〜100％の症例では、三次性および先天性梅毒で陽性です。 この種の研究を行う手法はRIBTよりも単純ですが、この反応はRIBTに特異性が劣るため、RIFをRIBTに置き換えることは不可能です。 RIF-10（RIF修正）はより敏感で、RIF-200とRIF-absはより具体的です。

米。 9.梅毒の血液検査-蛍光抗体法（RIF）の反応。

梅毒トレポネーマ免疫応答（PALRT）

反応の本質は、補体の存在下で患者の血清によって感作された淡いトレポネーマが赤血球の表面に付着することです。 得られた複合体は、セトロフゲーション中に沈殿します。 このテストの感度と特異性は、RIFとRIBTに近いものです。

梅毒のイムノアッセイ（ELISA）

ELISAの助けを借りて、クラスMおよびGの免疫グロブリンが決定されます。IgM-ELISAはスクリーニングおよび確認テストとして使用できます。 ELISAの感度とその特異性はRIFのものと同様です。 梅毒では、ELISAは感染の3か月目から陽性の結果をもたらし、かなり長い間（時にはすべての生涯）陽性のままです。

米。 10.イムノアッセイアナライザー。

受動的（間接的）血球凝集反応（RPHA）

RPHAは、梅毒トレポネーマの抗原が吸着されている赤血球が、患者の血清の存在下で互いにくっつく（血球凝集）能力に基づいています。 RPGAは、潜伏性を含むあらゆる形態の梅毒を診断するために使用されます。 応募する場合 高品質抗原、このタイプの血清学的反応は、特異性と感度の点で他のすべてのテストを上回っています。

米。 11. RPHAは、あらゆる形態の梅毒を診断するために使用されます。

米。 12.梅毒の分析-受動的（間接的）血球凝集（スキーム）の反応。

米。 13.チューブの底全体を占める逆傘の光景は、肯定的な反応を示しています。 赤血球が試験管の底の中央にある柱（「ボタン」）に定着する場合、赤血球は陰性反応を示します。

米。 14.実験室条件でのRPGAテスト。

微生物学的診断

血清学的診断とともに、淡色トレポネーマを検出する方法（微生物学的診断）は、特に血清陰性梅毒の期間中、血液中に抗体がないときに重要な役割を果たしますが、新鮮な原発性梅毒の最初の症状がすでにあります（ハード下疳）。

研究のための生物学的材料は、固形潰瘍（下疳）の表面からの分泌物、膿疱性梅毒の内容物、しだれおよびびらん性丘疹、感染した点状物です。 リンパ節、脳脊髄液および羊水、PCR用-血液。

梅毒の原因物質を検出するための最良の技術は、顕微鏡の暗視野で生物学的物質を検査することです。 この手法により、生きた状態の淡いトレポネーマを観察し、その構造的特徴と動きを研究して、病原性病原体と腐生植物を区別することができます。

米。 15.梅毒の分析-暗視野顕微鏡。

米。 16.乾燥塗抹標本を研究する場合、Romanovsky-Giemsaによる染色が使用されます。 淡いトレポネーマはピンク色になり、他のすべての種類のスピロヘータは紫色になります。

暗視野顕微鏡による淡いトレポネーマの検出は、梅毒の最終診断の絶対的な基準です。

米。 17.バクテリアを検出するために、免疫蛍光反応（RIF）が使用されます-トレポネマルテスト。 特定の抗原-抗体複合体は、発光顕微鏡の光の中で、蛍光色素で標識された特定の血清と組み合わされると、細菌の緑がかった輝きを与えます。

米。 18.梅毒の原因物質は、レバディティ法（銀含浸）に従って調製された塗抹標本ではっきりと見えます。 感染組織の細胞の黄色を背景にした暗い色の淡いトレポネーマ。

米。 20.写真は、淡いトレポネーマのコロニーを示しています。 バクテリアの培養を得るのは難しいです。 それらは実際には人工栄養培地では増殖しません。 馬とウサギの血清を含む培地では、コロニーは3〜9日目に現れます。

梅毒のPCR

ポリメラーゼ連鎖反応を実行する方法は、今日効果的で有望です。 梅毒のPCRを使用すると、数時間以内に結果を得ることができ、診断のために収集された資料には少なくともいくつかの病原体が存在する可能性があります。

米。 21.梅毒のPCRにより、DNAまたはその淡いトレポネーマの断片を検出できます。

この研究方法の感度は、生体物質中の淡いトレポネーマの存在に依存し、98.6％に達します。 このテストの特異性は大きく依存します 正しい選択診断中の増幅のターゲットであり、100％に達します。

同時に、十分に研究されていないため 比較特性梅毒とPCRを診断するための直接的な方法の感度と特異性、病気を診断するためのロシア連邦でのこの検査方法はまだ許可されていません。

梅毒のPCRは、HIV患者の血清学的研究方法を使用して梅毒を診断することが困難な場合に、先天性梅毒である神経梅毒を診断するための追加の方法として、一部の場合にのみ実行できます。

米。 22. PCRを使用したトレポネーマパレットDNAの検出は、生菌の存在または死骸の残骸のいずれかを示しますが、追加のコピーを形成できる染色体DNAの個々のセクションの追加のコピーが含まれています。

血清学的方法に基づく反応のセットです 抗原抗体相互作用（Ag-Ab）感染症の病原体の抗原、または実際には微生物の抗原に対する抗体を血清および他の体液で検出することを目的としています。 血清学的方法は、高い感度と特異性が特徴です。 この方法の反応のほとんどは、実行と記録が簡単で、幅広い実験室で利用できます。原則として、安全で経済的であり、標準化に適しています。 に 短所血清学的方法は次のように考えられます。1）病原体の分離ではなく、病原体に対する（免疫）生物の反応によって病気の病因が判断される場合の結果の間接的な性質。 2）患者の体内への非経口的介入の必要性。 3）ほとんどの場合、体液性免疫応答の自然なダイナミクスによって説明される診断の遅れ。 4）現在の感染症に対するAbの既往症のAb（以前の病気またはワクチン接種の結果として）を服用する能力。 3番目と4番目の微生物抗原を決定する際に欠点はありませんが、異なる微生物の抗原の循環の特性を考慮し、これらの特徴を研究のための材料を取る可能性と相関させる必要があります。

血清学的方法の段階：

1）取る 研究資料..。 ほとんどの場合、材料は 血清..。 血栓の形成後に得られます。血液は、標準的な方法に従って厳密に無菌状態で収集する必要があります。

2）特定の症例に対する血清学的反応の選択は、研究の目的、疑わしい疾患、疾患の段階、研究の材料、反応の感度、および特定の検査室の能力に依存します。 ArだけでなくAbも検出するために、凝集反応が使用されます（ RA）、受動的血球凝集（ RPGA））、免疫蛍光抗体法 （リーフ）、血球凝集の阻害（ RTGA）, 降水量, 凝集、補体結合反応（CSC）など。

3）血清学的反応を設定し、

4）感染の血清学的マーカーの存在を決定するための血清学的反応の登録。

さまざまな血清学的反応は、いくつかの特徴があります 一般的な特性:

1）血清学的反応はすべて、AbとArの間の相互作用の反応であるため、すべての場合において、研究対象の基質にAbの存在を確立するには、既知の標準的な小体または可溶性Arのセットが必要です。 診断..。 次に、Arの存在を確立するために、セット 免疫診断血清、

2）ArとAbの相互作用は、電解質の存在下でのみ実行されます。電解質は通常、等張塩化ナトリウム溶液または緩衝液混合物として使用されます。システムのpHは約7である必要があります。

3）Ag-Ab複合体の形成には、特別な温度条件下（+ 4°Cから37°C）でのインキュベーション期間が必要です。 特定の免疫複合体の形成はすぐに起こります。 肉眼で見える現象（凝集、溶解など）-ゆっくり、数時間または数日後、

4）血清学的反応の両方の成分（抗原と抗体）が同等の比率で存在する必要があります。 成分のいずれかが過剰になると、Ag-Ab複合体の形成がブロックされ、偽陰性の結果が生じます。

血清学的反応は、虫眼鏡を使用して視覚的に記録されます。 血清学的反応を考慮することの本質は、Ag-Ab複合体の形成によるAgとAbの結合現象の決定に還元されます。 視覚的には、Ag-Ab複合体の形成には、凝集と沈殿という2つの主要な現象が伴います。 それらの違いは、それらに特異的な抗原と抗体の特性によって決まります。 同時に、微生物抗原の中には、非沈殿性抗原の合成を誘導するものもあり、この場合のAg-Ab複合体の形成は、凝集現象または沈殿現象のいずれも伴わない。 Ag-Ab複合体の形成の事実を特定するには、反応の診断コンポーネントに特別なマークを付けるか、診断抗原を別の凝集状態に移す必要があります。

反応を評価するとき、3つの主要な基準が使用されます：1）反応の存在と強度（プラスなど）。 2）診断力価、3）疾患の経過中のAb力価の4倍以上の増加。 反応の存在は、視覚現象または免疫化学的マーカーの結合によって確立されます。 血清学的反応の強度を評価するために、4 "+"の原理が使用されます（表7）。

表7。

凝集および沈殿反応のための4 "+"による血清学的反応を評価するためのシステム

血清学的反応の結果を定量的に提示するために、抗体または抗原力価の概念が使用されます。 Abの種類（またはArの力価）を決定するには、血清または他の物質（滴定剤）の一連の希釈液を調製して血清学的反応を設定する必要があります。 血清の希釈液を調製するときは、電解質溶液が使用されます（ほとんどの場合、等張塩化ナトリウム溶液）。 希釈（滴定）ステップは、電解質溶液の量と血清の量の比率によって設定されます。 例えば、第１の試験管で２倍のステップで連続希釈して、等量の電解質溶液と血清を混合し、５倍のステップで、１容量の血清を４容量部の電解質溶液に加える。 、10回のステップで-9容量の電解質溶液に1容量の血清を追加します（表8）。

血清学的診断法は、血清診断（被験者の血清中の特定の抗体の検出）と血清同定（そのタイプとタイプを確立するための単離された病原体の抗原特性の決定）の2つの研究分野の使用を提供します。 。

血清診断では、凝集、沈殿、溶解、CSC反応、標識された抗原または抗体を使用した反応が使用されます。 これらの反応の構成要素は次のとおりです。検査された患者の血清および標準的な抗原製剤。 研究の目的は、研究対象の血清中の感染症の病原体に対する抗体の力価を決定することです。

特にそれらがいわゆる「診断」力価のレベルに達した場合、特定の抗体の高力価の検出は、推定診断を確認する。 ペア血清の研究は、病気の最初（3〜4日目）に採取された血清と病気の7〜10日目に得られた血清を同時に滴定する場合に非常に重要です。 抗体価の4倍の増加は診断的価値があります。

血清同定では、ガラス上での凝集反応が最も頻繁に使用されます。 反応成分：成長 純粋な文化病気の原因物質（抗原）と標準的な診断用免疫ウサギ血清（抗体）。

血清学的方法の尊厳-シンプルさ、可用性、高感度、特異性、迅速性。

欠陥：高価な標準的な薬や機器の必要性。

アレルギー法

この方法特定の感染性病原体に対する体の感作の識別を提供します。 診断値..。 いくつかの感染症の経過は、遅延型過敏症の形成を伴うことが知られています。 これに関して、そのような患者への少量のアレルゲンの皮内投与は、アレルゲンとの繰り返しの遭遇によって引き起こされる、身体からの対応する反応を引き起こす。 反応は遅れて進行し、48〜72時間後にアレルゲンの注射部位に発赤、腫れ、時には浸潤（陽性反応）が現れます。 体が感作されていない場合、皮内投与は体からの反応（陰性反応）を引き起こしません。 業界では、ツベルクリン、ジセンテリン、ブルセリン、ツラリンなどの皮膚アレルギー検査用の特別な製剤を製造しています。

アレルギーの方法は特に持っています 非常に重要感染症の原因物質の特定が困難または不可能な場合（ハンセン病など）、またはこれに時間がかかる場合（ブルセラ症など）。 ツベルクリンによる検査は、診断目的だけでなく、BCGワクチンによる子供の再ワクチン接種のタイミングを決定するため、および集団的な抗結核免疫を研究するためにも実際に使用されます。

アレルギー法の利点 - そのシンプルさ、信頼性、表現力。

欠陥 -すべての感染症が遅延型過敏症を発症するわけではないため、使用は制限されています。

診断における血清学的反応

感染症

現在、免疫学的研究手法は、感染症および非感染症の検査室診断に広く使用されています。

抗原と抗体の間の相互作用反応は血清学的と呼ばれます（血清-血清、ロゴ-学習）。

すべての血清学的反応の本質は、複合体の形成を伴う抗原とそれに対応する抗体の特定の組み合わせにあります。 免疫学的対応（相同性）-主成分-抗原と抗体があれば、血清学的反応が可能です。 免疫学的特異性は、抗原と抗体の構造的相補性に基づいています。

抗原と抗体の相互作用のプロセスは、特異的および非特異的の2つの段階で進行します。 最初のフェーズは急速に発展しています。 これは、抗体の活性中心と対応する（相同）抗原の決定基との特定の接続で構成されています。 次の段階はよりゆっくりと進行し、非特異的です 外向きの症状抗原抗体反応（凝集、濁りなど）

血清学的検査は2つの目的で使用されます：

1）既知の抗原を使用して研究対象の血清中の抗体を検出する（血清診断）。

2）既知の血清を使用して未知の抗原を確立する（血清同定）。

微生物学的研究における未知の抗原の決定は、対象から分離された病原体の一般的な種、タイプを確立するために実行されます。 このような場合、反応の2つの主要成分（抗体、抗原）のうち、抗原は不明です。反応は既知の抗体を使用して実行する必要があります。 この場合、抗原は試験物質から分離された微生物の純粋な培養物です。 免疫診断血清は既知の抗体として使用されます。 後者は、対応する細菌抗原で以前に免疫された動物（ほとんどの場合ウサギ）の血液から得られます。 免疫血清には含まれている必要があります 上級特定の抗体。

さらに、血清学的検査を使用して、さまざまな非細菌抗原を決定することができます。血液型、組織抗原、腫瘍を確立するため、臓器および組織移植のためのドナーとレシピエントのペアを選択するためなどです。

血清学的検査は、血清中の抗体を検出するためにも使用できます。 このような場合、既知の抗原（diagnosticum）が必要です。 生きているまたは殺された微生物の懸濁液、それらからの抽出物または単離された化学画分を抗原として使用することができる。

公衆衛生の実践で現在使用されている多くの血清学的検査は、抗原抗体の会合の現象が異なります。 反応の見かけの発現は、使用される技術、抗原または免疫血清が使用される物理的状態、補体が反応に関与するかどうかによって異なります。 たとえば、小体抗原を使用すると、凝集現象が発生します。粒子の付着（凝集反応）です。 粒子状抗原は比較的大きな粒子であるため、目に見える綿状の沈殿物が形成されます。 反応に可溶性抗原を使用すると、細かく粒状の沈殿物の沈殿が観察されます（沈殿反応）。 細菌抗原と免疫血清との相互作用の反応に補体が導入されると、溶菌（細菌抗原の溶解）または赤血球の溶解（抗原として使用される場合）が起こります。 蛍光色素、酵素または放射性同位元素で標識された免疫血清の血清学的反応での使用は、対応する現象（発光、色の変化または放射性同位元素標識の活性）に従って抗体への抗原の特異的結合を確立することを可能にします。

特異性や感度などの基準は、血清学的反応を評価するために使用されます。 特異性は、相同抗体とのみ反応する抗原の能力です。 感度は、最小限の量の抗原および抗体との特定の相互作用の能力です。

凝集反応

凝集反応（RA）は、抗原と抗体の特異的な相互作用であり、血清抗体の影響下での抗原の接着と電解質の存在下でのそれらの沈殿で表されます。 提案された血清学的反応の最初のものでした。

凝集反応の特徴は、細胞または他の小体粒子がその硬化中に抗原として使用されることです。 この反応は、免疫血清の相同抗体と特異的に結合して、穀物、フレーク、塊の形で沈殿物を形成する小体抗原の能力に基づいています。 反応は電解質の存在下でのみ起こります。 反応に使用される抗原は凝集原と呼ばれ、抗体は凝集素と呼ばれ、結果として生じる沈殿物は凝集物と呼ばれます。

凝集反応における抗原として、等張塩化ナトリウム溶液中の生培養物の懸濁液、またはホルマリン、アルコールまたは加熱によって殺された微生物、ならびに赤血球、白血球または他の細胞を使用することができる。

抗体の供給源は、適切な抗原で動物を免疫することによって得られる既知の凝集血清、または検査されている患者の血清である。

存在 違う方法凝集反応を設定します。 これらのうち、最も一般的に使用されるのは、ガラス上での配向反応、試験管内での膨張凝集、血球凝集および間接血球凝集反応（RNGA）です。

同様の情報。

血清学的研究（テスト） — 実験方法患者の生体物質中の抗体または抗原の検出に基づく研究。 ほとんどの場合、血液は分析に使用されますが、尿、唾液、化膿性分泌物、または生検中に採取された組織サンプルはあまり使用されません。

応用分野

• 血液型の決定。
• 特定の腫瘍タンパク質の同定-腫瘍マーカー（たとえば、卵巣癌、前立腺癌の疑いがある場合、 膀胱、胃など）。
• ウイルス、細菌、真菌、原虫感染症（HIV、梅毒、トキソプラズマ症、クラミジア、風疹、ヘルペス、蠕虫症、ダニ媒介性脳炎など）の診断。
• 研究対象の生体材料に少量（10-10 g / l未満）で含まれるホルモン、酵素、および薬物の測定。

この方法の本質は血清学的検査です

血清学的検査は技術が異なりますが、それらはすべて抗原（外来化合物）と対応する抗体との相互作用の結果です。 この研究は、2つの連続したフェーズで構成されています。 最初の段階は、免疫複合体の形成を伴う抗原と抗体の間の相互作用（陽性反応）によって特徴付けられます。 第2段階では、外部の兆候が現れ、これらの非常に複雑なものの存在を確認します（反応の種類によっては、これは試験溶液の濁り、色の変化、フレークの喪失などである可能性があります）。 目に見える物理現象がないことは、陰性のテスト結果と見なされます。

血清学的検査の準備

研究の種類によって異なります。 医療専門家は、手順の予約をするときに特定の検査に合格することの特徴について話す必要があります。

スペクトラクリニックで必要な血清学的検査を受けることができます。 私たちは、ヨーロッパの基準に従って機能する最高のメトロポリタンラボで分析を注文します。これは、迅速で信頼性の高い結果を保証するものです。 私たちの医師は、結論を解読し、さらなる診断のための推奨事項を提供するのに役立ちます。

血清学的研究（ラテン血清血清+ギリシャのロゴの教義）-血清学的反応を使用して抗原または抗体を特定するために、ヒトまたは動物の血液の特定の特性を研究する免疫学の方法。

Sの始まりと。 前世紀の終わりに、抗原と抗体の結合（抗原-抗体反応を参照）には、視覚的観察に利用できる多くの現象（凝集（を参照）、沈殿（を参照））が伴うことが判明した後、または溶解。 これらの成分の1つがわかっている場合、抗原（を参照）または抗体（を参照）が特異的に認識される可能性があります。

1897年、F。Vidalは、腸チフス患者の血清が腸チフス菌を選択的に凝集させるため、この反応（Vidalの反応を参照）を実験室で使用できると報告しました。 腸チフスの診断。 同じ年に、ペスト、腸チフス、コレラ菌の培養液のろ液が、対応する免疫血清と結合すると、フレークを形成したり、沈殿したりすることが示されました。

沈殿反応は、あらゆるタンパク質抗原の検出に適していることが証明されました。 1900年から1901年。 K. Landsteinerは、人々の赤血球には2つの異なる抗原（AとB）があり、血清には2つの凝集素（aとP）があることを発見しました。これは、血液型を決定するための血球凝集反応の使用に寄与しました（を参照）。 。

血液型とRh因子を決定するための凝集反応は、産科診療、輸血、組織移植で使用されます。 Rh因子に対する抗体（を参照）は不完全な抗体であり、Rh陽性赤血球と直接反応することはできません。したがって、それらを検出するには、不完全な検出に基づいてクームス反応を使用します（クームス反応を参照）。抗グロブリン血清を使用した抗体。 試験血清を既知の特異性の赤血球に加え、続いてIgGに対する抗グロブリン血清を加えます（間接クームス反応）。 研究対象の血清の不完全な抗体のFabフラグメントは赤血球に結合し、抗IgG抗体はこれらの抗体の遊離Fcフラグメントに結合し、赤血球は凝集します。 溶血性貧血の診断には、直接クームス反応が使用されます。このような患者の体内では、赤血球が血液中を循環するRh因子に対する抗体と結合します。 それらを識別するために、IgGに対する抗体が患者から採取された赤血球に追加されます。 赤血球凝集の出現は、病気の診断を確認します。

血球凝集の阻害の反応-RTGA（血球凝集を参照）-は、ウイルスによる赤血球の赤血球凝集の免疫血清による予防（阻害）の現象に基づいています。 ウイルスの血球凝集の現象はセロールではありません。 反応し、ウイルスと赤血球受容体の接続の結果として発生しますが、RTGAは抗ウイルス抗体を検出および滴定するために使用される血清学的反応です。 RTGAは、インフルエンザ、はしか、風疹、おたふく風邪、ダニ媒介性脳炎、およびその他のウイルス感染症の血清診断の主な方法であり、その原因物質は血球凝集特性を持っています。

受動的または間接的な血球凝集の反応。赤血球または中性の合成化学物質（ラテックス粒子など）を使用し、その表面に抗原（細菌、ウイルス、組織）または抗体が吸着します（ボイデンの反応を参照）。 それらの凝集は、適切な血清または抗原が追加されたときに発生します。 抗原で感作された赤血球は、抗原性赤血球診断と呼ばれ、抗体の検出と滴定に使用されます。 抗体で感作された赤血球は免疫グロブリン赤血球診断薬と呼ばれ（を参照）、抗原を検出するために使用されます。

受動的血球凝集反応は、細菌（台風および傍台風熱、赤痢、ブルセラ症、疫病、コレラなど）、原生動物（マラリア）およびウイルス（インフルエンザ、アデノウイルス感染症、ダニ媒介性脳炎、クリミア出血熱など）によって引き起こされる疾患を診断するために使用されます、など）..。 感受性における受動的血球凝集の反応は、アレナウイルス病（を参照）、特にリンパ球性脈絡髄膜炎においてウイルスを分離する方法に劣っていません。 リンパ球性脈絡髄膜炎のウイルス抗原は、数万倍に希釈された抽出臓器の懸濁液を用いた受動的血球凝集反応でウイルスキャリア（ハツカネズミ）で検出されます。 受動的血球凝集反応におけるサルモネラ症では、細菌は1 gの糞便中、最大数百の微生物体の濃度で測定されます。 食品 1gの材料に少なくとも500の微生物が含まれている場合に検出されます。

受動的血球凝集反応は、ウイルス性B型肝炎の診断と予防に使用されます。ソビエト連邦では、急性B型肝炎患者の血液中のHBs抗原（オーストラリアの抗原を参照）を検出するために、ニワトリ赤血球である診断が行われます。 HBs抗原に対してヤギ免疫グロブリンで感作。 診断薬の一滴は、検査された人々の等量の血清と組み合わされ、HBs抗原がその中に存在する場合、凝集が起こります。 この反応は、最大1.5 ng / mlHBs抗原を捕捉することができます。 HBs抗体を検出するために、患者の血液から分離され、それらに吸着されたHBs抗原を持つ赤血球が使用されます。 受動的血球凝集反応は、ペニシリンやインスリンなどの薬物やホルモンに対する患者の過敏症を特定するためにも使用されます。 この場合、ヒト血液型0の赤血球は薬剤で感作され、患者の血清中の凝集素を検出するために使用されます。

受動的血球凝集反応は、妊娠を確立するために尿中の性腺刺激ホルモンを検出するために使用されます（絨毛性ゴナドトロピンを参照）。 このために、このホルモンの標準血清を検査する尿と一緒にインキュベートします。 その後、ホルモンが吸着した赤血球を添加すると、尿に含まれるホルモンが凝集抗体を中和するため、凝集は起こりません（陽性反応）。

沈殿現象に基づく反応

それらは、多種多様な抗原および抗体を検出するために使用されます。 定性的反応の最も単純な例は、試験管内の抗原-抗体沈着の境界での不透明な沈殿バンドの形成です。 半液体寒天またはアガロースゲルでのさまざまなタイプの沈殿反応が広く使用されており（Ouchterlonによる二重免疫拡散の方法、放射状免疫拡散の方法、免疫電気泳動）、ライ麦は定性的および定量的の両方です（免疫拡散、免疫電気泳動を参照）。

二重免疫拡散を設定するには、溶融したゲルの層をガラスプレートに注ぎ、硬化後、直径1.5〜3mmのウェルを切り出します。 試験抗原は円形に配置されたウェルに配置され、既知の特異性の免疫血清は中央のウェルに配置されます。 互いに拡散し、相同な血清と抗原が沈殿物を形成します。 放射状免疫拡散（マンチーニの方法による）で、免疫血清が寒天に加えられます。 ウェル内に配置された抗原は寒天中を拡散し、免疫血清による沈殿の結果、ウェルの周囲に不透明なリングが形成され、その外径は抗原の濃度に比例します。 この反応の修正は、IgMおよびIgG抗体を認識するためにインフルエンザの診断に使用されます（免疫グロブリンを参照）。 寒天にインフルエンザ抗原を加え、ウェルに血清を加えます。 次に、プレートをIgMまたはIgG抗体に対する免疫血清で処理します。これは、対応する抗体と抗原との反応を特定するのに役立ちます。 この方法では、抗体の力価と特定のクラスの免疫グロブリンに属する抗体を同時に測定できます。

免疫電気泳動の一種は放射性免疫泳動です。 この場合、ゲル内の抗原の動きと平行に切り込まれた溝に抗原を電気泳動的に分離した後、最初に決定された抗原に対する放射性ヨウ素標識免疫血清を注ぎ、次に形成された抗体の端であるIgG抗体に対する免疫血清を注ぎました-抗原複合体が沈殿します。 結合していない試薬はすべて洗い流され、オートラジオグラフィーによって抗原-抗体複合体が検出されます（を参照）。

補体を含む反応。 補体が関与する反応（を参照）は、補体サブコンポーネントCl（Clq）、次に他の補体コンポーネントが免疫複合体に付着する能力に基づいています。

補体結合反応により、抗原-抗体複合体による補体結合の程度に応じて、抗原または抗体を滴定することができます。 この反応は、抗原とテストされた血清との相互作用（テストシステム）と溶血性血清とヒツジ赤血球との相互作用（インジケーターシステム）の2つのフェーズで構成されます。 反応が陽性の場合、補体はテストシステムに結合し、抗体で感作された赤血球を追加すると、溶血は観察されません（補体結合反応を参照）。 この反応は、内臓梅毒（ワッセルマン反応を参照）およびウイルス感染（ウイルス学的研究を参照）の血清診断に広く使用されています。

細胞溶解。 細胞構造に対する抗体は、補体の関与により、これらの構造を持つ細胞を溶解することができます。 赤血球溶解は、ヘモグロビン放出の程度と強度によって簡単に評価できます。 核細胞の溶解は、メチレンブルーで染色されていない死んだ細胞の割合を計算することによって評価されます。 放射性クロムもよく使用され、事前に細胞に化学的に結合されています。 破壊された細胞の数は、細胞溶解中に放出された非結合クロムの量によって決まります。

赤血球の放射状溶血の反応は、ゲル内で発生する可能性があります。 ラム赤血球の懸濁液を、補体を加えたアガロースゲルに入れます。 ガラス上で凍結した層に穴を開け、溶血性血清を導入します。 抗体の放射状拡散の結果として、溶血ゾーンがウェルの周りに形成されます。 溶血ゾーンの半径は、血清力価に正比例します。 インフルエンザウイルスの糖タンパク質血球凝集素、風疹、ダニ媒介性脳炎などの抗原を赤血球に吸着させると、これらのウイルスに対する免疫血清による溶血の現象を再現できます。 ゲル中の放射状溶血の反応は、設定が簡単で、血清阻害剤に対する非感受性であり、段階希釈に頼らずに溶血ゾーンの直径に沿って血清を滴定できるため、ウイルス感染の診断に応用されています。

免疫接着。 赤血球、血小板、その他の血球は、補体の3番目の成分（C3）の受容体を表面に持っています。 対応する免疫血清と補体が抗原（細菌、ウイルスなど）に追加されると、補体のC3成分で覆われた抗原-抗体複合体が形成されます。 血小板と混合すると、補体のC3成分のおかげで、抗原抗体複合体が細胞に定着し、細胞を凝集させます（免疫接着を参照）。 この反応は、HLAシステムの抗原を決定するために使用され（移植免疫を参照）、多くの研究で使用されます ウイルス感染（ダニ媒介性脳炎、デング熱）、ライ麦は免疫パトールを伴います。 抗体と組み合わせた血液中のウイルス抗原のプロセスと循環。

中和反応は、高分子または可溶性抗原の特定の機能、例えば、酵素活性、細菌毒素、ウイルスの病原性を中和する抗体の能力に基づいています。 細菌学では、この反応は、抗ストレプトリシン、抗ストレプトキナーゼ、および抗スタフィロリシンを検出するために使用されます。 毒素の中和反応は、biolによって評価することができます。 効果があるので、例えば、抗破傷風免疫および抗ボツリヌス血清を滴定します（毒素-抗毒素反応を参照）。 動物に注射された毒素と抗血清の混合物は、動物の死を防ぎます。 さまざまなオプション中和反応はウイルス学で使用されます。 ウイルスを適切な抗血清と混合し、この混合物を動物または細胞培養に導入することにより、ウイルスの病原性が中和されます。

化学的および物理的タグを使用した反応

1942年にA.N. Coonsによって開発された蛍光抗体法は、セロールに使用されます。 蛍光色素で標識された血清の反応（免疫蛍光抗体法を参照）。 蛍光色素で標識された血清は、抗原と抗原-抗体複合体を形成し、蛍光色素の輝きを励起する紫外線で顕微鏡下で観察できるようになります。 直接免疫蛍光反応は、細胞抗原の研究、感染細胞のウイルスの検出、塗抹標本の細菌とリケッチアの検出に使用されます。 したがって、狂犬病を診断するために、ウイルスを持っている疑いのある動物の脳片のプリントを発光性狂犬病血清で処理します。 陽性の結果として、神経細胞の原形質に明るい緑色の塊が観察されます。 インフルエンザ、パラインフルエンザ、およびアデノウイルス感染のエクスプレス診断は、鼻粘膜からの痕跡の細胞内のウイルス抗原の検出に基づいています。

間接免疫蛍光法は、IgG抗体に対する発光免疫血清を使用した抗原-抗体複合体の検出に基づいてより広く使用されており、抗原を検出するだけでなく、抗体を滴定するためにも使用されます。 この方法は、ヘルペス、サイトメガリップ、およびラッサ熱の血清診断に応用されています。 実験室では、抗原を含む細胞調製物のストックを-20°Cで保存する必要があります。たとえば、薄いガラス片上で増殖し、ウイルスまたはアセトンで固定した鶏線維芽細胞に感染したVERO細胞です。 試験血清を調製物の上に重層し、調製物をf 37°のサーモスタットに入れて免疫複合体を形成し、次に、結合していない試薬を洗浄した後、これらの複合体をヒトグロブリンに対する標識発光血清で検出します。 IgMまたはIgG抗体に対する標識免疫血清を使用すると、抗体の種類を区別し、IgM抗体の存在によって初期の免疫応答を検出することができます。

酵素免疫学的方法では、酵素と結合した抗体が使用されます、Ch。 到着 西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ。 標識された血清と抗原の化合物を検出するために、基質が添加されます。基質は、血清に付着した酵素によって分解され、黄褐色（ペルオキシダーゼ）または黄緑色（ホスファターゼ）の色になります。 それらはまた、発色性だけでなく、発光性基質も分解する酵素を使用します。 この場合、肯定的な反応で、輝きが現れます。 蛍光抗体法と同様に、酵素法は細胞内の抗原を検出したり、抗原を含む細胞上の抗体を滴定したりするために使用されます。

最も一般的なタイプの酵素免疫学的方法は免疫吸着です。 セルロース、ポリアクリルアミド、デキストラン、およびさまざまなプラスチックなどの固体担体上で、それらは抗原を吸着します。 ほとんどの場合、キャリアはマイクロパネルウェルの表面です。 試験血清は、吸着された抗原とともにウェルに添加され、次に酵素標識抗血清および基質が添加されます。 液体培地の色の変化により、肯定的な結果が考慮されます。 抗原を検出するために、抗体が担体に吸着され、次に試験物質がウェルに導入され、酵素標識抗菌血清との反応が進行します。

放射性免疫学的方法は、抗原または抗体の放射性同位元素標識の使用に基づいています。 もともとは、血中を循環するホルモンのレベルを測定するための特定の方法として開発されました。 テストシステムは、同位体標識ホルモン（抗原）とそれに対する抗血清でした。 目的のホルモンを含む材料をこのような抗血清に加えると、抗体の一部に結合します。その後、標識された滴定ホルモンを導入すると、コントロールと比較して、抗体に結合する量が少なくなります。 結果は、結合放射性ラベルと非結合放射性ラベルの曲線を比較することによって評価されます。 このタイプの方法は、競合反応と呼ばれます。 ラジオイムノアッセイ法には他にも変更があります。 ラジオイムノアッセイ法は、ホルモンの測定に使用される抗原と抗体を測定するための最も感度の高い方法です。 医薬品細菌性、ウイルス性、リケッチア性、原生動物性疾患、血液タンパク質、組織抗原の診断のための抗生物質。

医療行為における血清学的研究方法の比較特性と使用

S.の方法と。 使用の感度と汎用性を高める方向で絶えず改善されています。 最初はセロール。 診断は抗体の検出に基づいていました。 20世紀半ばの出現で。 より感度の高い蛍光抗体法と受動的血球凝集反応により、抗体だけでなく、患者の材料から直接抗原を検出することが可能になりました。 酵素免疫学的および放射性免疫学的方法は、免疫蛍光抗体法および受動的血球凝集法よりも感度が2〜3桁高く、biolの方法に近づいています。 バクテリアやウイルスの検出。 抗原と抗体の両方を検出するためのそれらの適用範囲は、理論的には無制限です。

Serodiagnosticsinf。 病気は、病原体がで検出されたかどうかに関係なく、分離された、または疑われる病原体に対する抗体の出現に基づいています 急性期疾患。 病気の発症時と2〜3週間で採取された血清のペアを調査します。 後で。 2番目の血清中の抗体が最初の血清と比較して少なくとも4倍増加することは、診断上重要です。 また、免疫グロブリン抗体のクラスがどのクラスで表されるかも重要です。 IgM抗体は、疾患の急性期の終わりと 初期段階回復期。 IgG抗体は回復期の後期に出現し、長期間循環します。 妊娠初期の女性が風疹ウイルスに対するIgM抗体を持っていることが判明した場合、この期間中、胎児はウイルスに特に敏感であるため、これが妊娠中絶の根拠となります。 異なるinfで。 病気の場合、最も具体的で便利な方法を選択的に使用します。

砂。 疫学で広く使用されています。 血液サンプルの体系的な収集と検査 異なるグループ集団は、病原体infのソースと集団の接触を理解することを可能にします。 病気。 集団免疫のレベルを研究することで、リスクの高いグループを特定し、ワクチン接種活動を計画して、感染の地理的な広がりを研究することができます。 砂。 様々 年齢グループ人口は、例えば、特定の期間におけるインフルエンザウイルスの異なる変異体の循環を遡及的に特定することを可能にしました。

砂。 対応する標的細胞を破壊する組織および臓器特異的抗体の出現を伴う遺伝性疾患（を参照）および自己免疫疾患の研究、ならびに腫瘍抗原の検出のための腫瘍学において非常に重要です。 したがって、肝臓癌の免疫診断は、免疫拡散法および放射線免疫学的方法による患者の血清中のα-フェトプロテインおよび他の胚性抗原の測定に基づいています。

セロールの使用により、細胞抗原、細菌およびウイルスの抗原の微細な抗原構造の研究における重要な科学的進歩が達成されています。 モノクローナル抗体の反応、ライ麦は抗原の決定因子を分離するために得ることができます。

参考文献：免疫学の研究方法、ed。 I.レフコビッツとB.ペルニス、トランス。 英語から、M.、1981; 免疫学へのガイド、ed。 O. E.VyazovおよびSh。X.Khodzhaeva、M.、1973; 臨床ガイドライン 実験室診断、ed。 V.V. Menshikov、M.、1982; 免疫学編 J.-F. バッハ、ニューヨーク、1978年。

S.Ya。ガイダモビッチ。