Sifilio analizė yra vienas iš labiausiai paplitusių laboratorinių tyrimų. Sifilio tyrimai yra plačiai naudojami atliekant profilaktinius tyrimus. Mikroskopija atskleidžia sifilio sukėlėją -. Serologinių reakcijų pagalba patvirtinama sifilio diagnozė, nustatoma latentinio sifilio diagnozė, stebimas gydymo efektyvumas ir nustatomas pacientų gydymas.

Sifilio diagnozė nustatoma remiantis klinikiniais duomenimis, sifilio sukėlėjų nustatymu medžiagų mėginiuose ir diagnozės patvirtinimu serologinių tyrimų metodais. Sifilio apraiškų yra daug ir įvairių, todėl šią ligą nustato skirtingų specialybių gydytojai. Diferencinė pirminio sifilio diagnostika atliekama su daugybe ligų.

Pav. 1. Nuotraukoje pirminė sifilio apraiška yra sunkus šansas.

Antikūnai prieš Treponema Pallidum ir serologinė diagnostika

Užsikrėtus sifiliu, paciento organizme susidaro antikūnai. Serologinė diagnostika padeda gydytojui ištirti sifiliu sergančio paciento organizmo antikūnų susidarymo dinamiką pradinėse ligos stadijose, gydymo laikotarpiu ir jam pasibaigus, išspręsti ligos atkryčio klausimą. pacientas ar pakartotinė infekcija (reinfekcija), siekiant diagnozuoti sifilį masinėmis medicinos sąlygomis.

Antikūnai prieš treponema pallidum IgM

IgM antikūnai gaminami pirmiausia po infekcijos. Jie pradedami aptikti naudojant serologines reakcijas nuo antros savaitės po užsikrėtimo. 6–9 ligos savaitėmis jų skaičius tampa didžiausias. Jei pacientas negydytas, antikūnai išnyksta po šešių mėnesių. IgM antikūnai išnyksta po 1–2 mėnesių. po, po 3 - 6 mėn. - po vėlyvo sifilio gydymo. Jei jų augimas yra užfiksuotas, tai tarnauja arba kalba apie pakartotinę infekciją. IgM molekulės yra didelės ir nepraeina pro placentą vaisiui.

Antikūnai prieš treponema pallidum IgG

Antikūnai IgG imunoglobulinai atsiranda pirmojo mėnesio pabaigoje (4-ąją savaitę) nuo infekcijos momento. Jų titras yra didesnis nei IgM. Po išgydymo IgG išlieka ilgą laiką.

Nespecifiniai antikūnai

Yra daug serologinių reakcijų. Taip yra dėl blyškių treponemų antigeninio daugybės. Sergančio žmogaus kraujo serume skirtingi etapai sifilis, be specifinių, susidaro tam tikri nespecifiniai antikūnai - agliutininai, jungiantis komplementą, immobilizinai, antikūnai, sukeliantys imuninę fluorescenciją, nuosėdos ir kt. Nespecifinių antikūnų aptikimo serologinės reakcijos turi santykinį specifiškumą, todėl, siekiant išvengti diagnostikos klaidų, reikia naudoti ne vieną, o kompleksinę reakciją (DAC).

Klaidingai teigiami sifilio testai

Skiriamasis bruožas ne treponeminis testas yra klaidingų teigiamų reakcijų gavimas. Antikūnai-reaktinai, kurie žmogaus kraujyje gaminasi prieš kardiolipino antigeną, registruojami ne tik sifiliu, bet ir kitomis ligomis: kolagenoze, hepatitu, inkstų ligomis, tirotoksikoze, vėžiu, infekcinėmis ligomis (raupsai, tuberkuliozė, bruceliozė, maliarija, , skarlatina), nėštumo ir menstruacijų metu, valgant riebų maistą ir alkoholį. Pažymima, kad klaidingai teigiamų reakcijų skaičius didėja su amžiumi.

Pav. 2. Nuotraukoje parodytas pirminis moterų sifilis.

Laboratorinė sifilio diagnostika naudojant serologinius tyrimus

Serologiniai tyrimai dėl sifilio skirstomi į treponeminius ir ne treponeminius.

1. Treponeminiai testai

Kardiolipino antigenas šioje grupėje yra naudojamas kaip antigenas. Daugiausia sifilio sukėlėjų yra lipidų antigenų. Jie sudaro 1/3 sausos ląstelės masės. Ne treponeminiais tyrimais nustatomi reagin antikūnai, kurie gaminasi prieš kardiolipino antigeną. Šiai grupei priklauso komplemento fiksavimo reakcija (PCCcard), mikrokritulių reakcija (RMP), greitas plazmos reaginų nustatymas (RPR) ir kt. Naudojant ne treponeminius tyrimus, atliekamas pirminis sifilio patikrinimas (gyventojų grupių tyrimas), o galimybė gauti rezultatus kiekybine versija leidžia naudoti šiuos testus gydymo efektyvumui stebėti. Teigiami ne treponeminių tyrimų rezultatai turėtų būti patvirtinti atliekant treponeminius tyrimus. Ne treponeminių testų išskirtinis bruožas yra klaidingų teigiamų reakcijų gavimas.

2. Treponeminiai testai

Treponemų testuose naudojami treponeminės kilmės antigenai, išskirti iš blyškios treponemos kultūros. Su jų pagalba patvirtinami teigiami ne treponeminių tyrimų rezultatai. Grupę sudaro: RSCtrep - komplemento rišimosi reakcija, RIF - imunofluorescencijos ir jo modifikavimo reakcija, RIT, RIBT - blyškių treponemų imobilizavimo reakcija, RPHA - pasyviosios hemagliutinacijos reakcija, ELISA - su fermentais susijęs imunosorbento tyrimas.

3. Sifilio tyrimai naudojant rekombinantinius antigenus

Šios grupės tyrimų antigenai yra genų inžinerija ir naudojami reakcijose - RPHA ir ELISA, atliekant imunoblotingo (IB) analizę ir imunochromatografinę analizę.

Pav. 3. Sifiliui diagnozuoti naudojamas serologinių tyrimų rinkinys.

Sifilio diagnozė naudojant ne treponeminius tyrimus

Sifiliui nustatyti naudojami ne treponeminiai tyrimai arba serologinių tyrimų kompleksas (CSR). Serologinė diagnostika taikoma nuo 5-osios savaitės nuo infekcijos momento arba nuo 2–3 savaičių po pasirodymo. Antikūnai nustatomi beveik visiems pacientams, turintiems šviežių pirminių ,. Serologinės reakcijos yra teigiamos 70–80% pacientų, 50–60% pacientų, sergančių tretiniu latentiniu sifiliu.

Serologiniai tyrimai, naudojant ne treponeminius tyrimus, gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus.

Pav. 4. Kraujo mėginiai sifiliui tirti.

Komplekso surišimo reakcija (CSC kortelė, CSC su CA, Wassermano reakcija)

Daugiau nei prieš 100 metų A. Wassermano sugalvota Wassermano reakcija (RW, RV) šiandien patyrė daug pokyčių, tačiau, kaip duoklė tradicijai, ji išlaikė savo vardą iki šiol. Komplemento surišimo reakcija naudojant kardiolipino antigeną yra skirta ne tik antikūnams aptikti, bet ir atliekama kiekybine forma - su skirtingais serumo praskiedimais, kas leidžia ją naudoti gydymo efektyvumui stebėti. Mažas jautrumas ir specifiškumas, klaidingų teigiamų rezultatų gavimas yra neigiami šio tipo tyrimo aspektai.

Wassermano reakcijos esmė yra tokia: antigenai, kurie naudojami inscenizuojant Wassermano reakciją, jei žmogaus kraujyje yra antikūnų prieš sifilio sukėlėjus, komplimentais jungiasi ir nusėda. Reakcijos intensyvumą rodo (+) ženklas. Reakcija gali būti neigiama (-) - be nuosėdų, abejotina (mažai nuosėdų arba +), šiek tiek teigiama (++), teigiama (+++) ir smarkiai teigiama (++++).

Jautresnė yra modifikuota Wassermano reakcija - Kolmerio reakcija. Su jo pagalba antikūnai aptinkami serumuose, kur Wassermano reakcija davė neigiamą rezultatą.

Esant ryškiai teigiamoms reakcijoms, atliekamas kiekybinis reagenų nustatymas, kurio serumas naudojamas praskiedus nuo 1:10 iki 1: 320, o tai leidžia naudoti tokio tipo tyrimus gydymo efektyvumui stebėti. Pavyzdžiui, antikūnų titro sumažėjimas ir vėlesnis jų seronegatyvumas (gaunami neigiami rezultatai) rodo sėkmingą ligos išgydymą.

Pav. 5. Kraujo tyrimas dėl sifilio - Wassermano reakcija.

Kritulių mikroreakcija (MPR)

Kritulių mikroreakcija naudojama atliekant masinius tam tikrų gyventojų grupių tyrimus, diagnozuojant sifilį ir stebint gydymo efektyvumą. Norint atlikti tokio tipo tyrimus, būtina mažas kiekis tirta medžiaga. Nusodinimo mikroreakcija pagrįsta imunologine antigeno-antikūno reakcija. Jei tiriamojo kraujo serume yra antikūnų, antigeno ir antikūno kompleksas nusėda susidarant žvyneliams. Reakcija vykdoma specialios stiklinės plokštelės šuliniuose. Jis apskaičiuojamas pagal nuosėdų intensyvumą ir dribsnių dydį (+) kaip Wassermano reakciją. Tiriant nėščias moteris, donorus ir stebint gydymo efektyvumą, jis nenaudojamas. VDRL ir RPR yra mikroreakcijų rūšys.

Pav. 6. Nusėdimo reakcijos tipas laše ant stiklo.

Pav. 7. Kraujo tyrimas dėl sifilio - mikrodalelių reakcija.

Pav. 8. Rinkinys greitam plazmos reaginų nustatymui (RPR sifilio testas).

Visus nespecifinių serologinių reakcijų metu gautus teigiamus testus reikia patvirtinti specifinėmis reakcijomis - treponeminiais testais.

Sifilio diagnozė naudojant treponeminius tyrimus

Atliekant treponeminius tyrimus, naudojami treponeminės kilmės antigenai. Neigiama jų pusė yra tai, kad neįmanoma jų naudoti gydymo veiksmingumui kontroliuoti, gauti teigiamų spirochetozės ir nevenerinių treponematozių rezultatų ir gauti klaidingai teigiamų rezultatų onkologinės ligos, raupsai, kai kurios endokrininės patologijos. Tokie bandymai kaip RPHA, ELISA ir RIF išlieka teigiami daugelį metų po sifilio išgydymo, o kai kuriais atvejais ir visą gyvenimą.

RIBT ir RIF yra specifiškesni iš visų serologinių tyrimų, naudojamų sifiliui diagnozuoti. Jie leidžia atskirti klaidingas teigiamas reakcijas, nustatyti vėlyvąsias sifilio formas, kurios atsiranda su neigiamomis reakcijomis. RIBT pagalba nėščioms moterims atpažįstamos klaidingai teigiamos reakcijos, kai būtina išspręsti vaiko infekcijos problemą.

Blyškių treponemų imobilizavimo reakcija (RIBT, RIT)

Reakcijos esmė ta, kad paciento kraujo serume esantys antikūnai imobilizuoja blyškią treponemą. Neigiama reakcija laikoma, kai imobilizuojama iki 20% patogenų, silpnai teigiama - 21 - 50%, teigiama - 50 - 100%. RIBT kartais duoda klaidingai teigiamų rezultatų. Testas yra sunkus ir daug laiko reikalaujantis, tačiau atliekant jis yra nepakeičiamas diferencinė diagnozė latentinės ligos formos ir klaidingai teigiami serologinių reakcijų rezultatai, įskaitant nėščias moteris. RIBT suteikia 100% teigiamą antrinio, ankstyvojo ir vėlyvojo sifilio rezultatą, 94 - 100% atvejų - esant kitoms sifilio formoms.

Imunofluorescencinė reakcija (RIF)

Reakcijos esmė ta, kad blyškios treponemos (antigenai) kartu su antikūnais, pažymėtais fluorochromais, liuminescenciniame mikroskope skleidžia geltonai žalsvą švytėjimą. Rezultatas įvertinamas (+) ženklu. RIF pagalba nustatomi A klasės imunoglobulinai. Imunofluorescencinė reakcija tampa teigiama anksčiau nei Wassermano reakcija. Antrinio ir latentinio sifilio atveju jis visada teigiamas, tretinio ir įgimto sifilio atveju - 95 - 100% atvejų. Šio tipo tyrimų atlikimo technika yra paprastesnė nei RIBT, tačiau neįmanoma pakeisti RIF RIBT, nes ši reakcija yra prastesnė už RIBT. RIF-10 (RIF modifikacija) yra jautresnis, RIF-200 ir RIF-abs yra specifiškesni.

Pav. 9. Kraujo tyrimas dėl sifilio - imunofluorescencijos (RIF) reakcija.

Treponema pallidum imuninės adhezijos reakcija (TPRT)

Reakcijos esmė ta, kad blyškios treponemos, įjautrintos paciento serumo, esant komplementui, prilimpa prie eritrocitų paviršiaus. Gaminami kompleksai nusodina cetrofugacijos metu. Šio bandymo jautrumas ir specifiškumas yra artimas RIF ir RIBT.

Imunologinis sifilio tyrimas (ELISA)

ELISA pagalba nustatomi M ir G klasės imunoglobulinai. IgM metodas - ELISA gali būti naudojamas kaip atrankinis ir patvirtinamasis testas. ELISA jautrumas ir specifiškumas yra panašūs į RIF. Sifilio atveju ELISA duoda teigiamų rezultatų nuo trečiojo infekcijos mėnesio ir išlieka teigiama gana ilgą laiką (kartais visą gyvenimą).

Pav. 10. Imunologinio tyrimo analizatorius.

Pasyvi (netiesioginė) hemagliutinacijos reakcija (RPHA)

RPHA remiasi eritrocitų, ant kurių adsorbuojami treponema pallidum antigenai, gebėjimu sulipti esant paciento serumui (hemagliutinacija). RPGA naudojama diagnozuoti visas sifilio formas, įskaitant latentinę. Kreipiantis Aukštos kokybės antigeno, šio tipo serologinė reakcija specifiškumo ir jautrumo atžvilgiu viršija visus kitus tyrimus.

Pav. 11. RPHA naudojamas diagnozuoti visas sifilio formas.

Pav. 12. Sifilio analizė - pasyvios (netiesioginės) hemagliutinacijos reakcija (schema).

Pav. 13. Apvirsto skėčio, užimančio visą vamzdelio dugną, vaizdas rodo teigiamą reakciją. Tuo atveju, kai eritrocitai nusėda kolonėlėje („mygtukas“) mėgintuvėlio dugno centre, jie kalba apie neigiamą reakciją.

Pav. 14. RPGA testas laboratorinėmis sąlygomis.

Mikrobiologinė diagnostika

Kartu su serologine diagnostika, svarbų vaidmenį vaidina blyškių treponemų nustatymo metodas (mikrobiologinė diagnostika), ypač seronegatyvaus sifilio laikotarpiu, kai kraujyje nėra antikūnų, tačiau jau yra pirmosios šviežio pirminio sifilio (kietojo šankras).

Biologinė tyrimų medžiaga yra kietų opų (šankrų) išsiskyrimas iš paviršiaus, pustulinių sifilidų, verkiančių ir erozinių papulių, užkrėstų punktų turinys. limfmazgiai, likvoro ir amniono skysčiai, skirti PGR - kraujas.

Geriausia sifilio sukėlėjų nustatymo technika yra biologinės medžiagos tyrimas tamsiame mikroskopo lauke. Ši technika leidžia pamatyti blyškią treponemą gyvoje būsenoje, ištirti jos struktūrinius ypatumus ir judesius, atskirti patogeninius patogenus nuo saprofitų.

Pav. 15. Sifilio analizė - tamsaus lauko mikroskopija.

Pav. 16. Tiriant sausus tepinėlius, naudojamas dažymas pagal Romanovsky-Giemsa. Blyškios treponemos tampa rausvos, visų kitų rūšių spirochetai tampa violetinės spalvos.

Blyškios treponemos nustatymas naudojant tamsiojo lauko mikroskopiją yra absoliutus galutinės sifilio diagnozės kriterijus.

Pav. 17. Bakterijoms aptikti naudojama imunofluorescencinė reakcija (RIF) - treponeminis testas. Specifinis antigeno ir antikūno kompleksas, sujungtas su fluorochromu pažymėtu specifiniu serumu, liuminescencinio mikroskopo šviesoje, suteikia žalsvą bakterijų spindesį.

Pav. 18. Sifilio sukėlėjai yra aiškiai matomi tepaluose, paruoštuose pagal „Levaditi“ metodą (impregnavimas sidabru). Blyškios tamsios spalvos treponemos infekuotų audinių ląstelių geltonos spalvos fone.

Pav. 20. Nuotraukoje matyti blyškios treponemos kolonija. Sunku gauti bakterijų kultūrą. Jie praktiškai neauga ant dirbtinių maistinių medžiagų. Terpėse, kuriose yra arklių ir triušių serumas, kolonijos atsiranda 3–9 dieną.

PCR dėl sifilio

Polimerazės grandininės reakcijos atlikimo būdas šiandien yra efektyvus ir perspektyvus. Sifilio PGR leidžia pasiekti rezultatą per kelias valandas, o diagnozei surinktoje medžiagoje gali būti bent keli patogenai.

Pav. 21. Poveikis sifiliui leidžia nustatyti DNR ar jos blyškios treponemos fragmentus.

Šio tyrimo metodo jautrumas priklauso nuo blyškių treponemų buvimo biologinėje medžiagoje ir siekia 98,6%. Šio testo specifiškumas daugiausia priklauso nuo teisingas pasirinkimas amplifikacijos tikslas diagnostikos metu ir siekia 100%.

Tuo pačiu metu dėl nepakankamai ištirtų lyginamosios charakteristikos tiesioginių sifilio ir PGR diagnozavimo metodų jautrumas ir specifiškumas, šis tyrimo būdas Rusijos Federacijoje ligai diagnozuoti dar nėra leidžiamas.

PCR dėl sifilio leidžiama atlikti tik kai kuriais atvejais, kaip papildomą įgimto sifilio, neurosifilio diagnozavimo metodą, kai sergant ŽIV serologinių tyrimų metodais sunku diagnozuoti sifilį.

Pav. 22. Treponema paletės DNR nustatymas naudojant PGR rodo arba gyvybingų bakterijų buvimą, arba negyvų liekanas, tačiau yra papildomų atskirų chromosomų DNR skyrių kopijų, galinčių sudaryti papildomas kopijas.

Serologinis metodas yra reakcijų rinkinys, pagrįstas antigeno ir antikūno sąveika (Ag-Ab) ir skirtas nustatyti serume ir kituose kūno skysčiuose antikūnus prieš infekcinių ligų sukėlėjų antigenus arba iš tikrųjų mikrobinius antigenus. Serologiniam metodui būdingas didelis jautrumas ir specifiškumas. Daugumą šio metodo reakcijų lengva atlikti ir užregistruoti, jos yra prieinamos įvairiausioms laboratorijoms, paprastai yra saugios, ekonomiškos ir pritaikomos standartizacijai. Į trūkumų serologinį metodą galima priskirti: 1) netiesioginiam rezultato pobūdžiui, kai apie ligos etiologiją sprendžiama ne pagal patogeno išskyrimą, o pagal organizmo reakciją (imuninę) į patogeną; 2) parenteralinės intervencijos į paciento organizmą poreikį; 3) daugeliu atvejų - vėlyva diagnozė, kuri paaiškinama natūralia humoralinio imuninio atsako dinamika; 4) gebėjimas vartoti anamnezinį Ab (dėl ankstesnės ligos ar vakcinacijos) nuo dabartinės infekcijos. Nustatant 3 ir 4 mikrobų antigenus, trūkumų nėra, tačiau būtina atsižvelgti į skirtingų mikrobų antigenų cirkuliacijos ypatumus ir sieti šiuos požymius su galimybe paimti medžiagą tyrimams.

Serologinio metodo etapai:

1) paėmimas medžiaga tyrimams... Daugeliu atvejų medžiaga yra kraujo serumas... Jis gaunamas susidarius kraujo krešuliui, kraujas turėtų būti renkamas griežtai aseptinėmis sąlygomis pagal standartinį metodą,

2) serologinės reakcijos pasirinkimas konkrečiu atveju priklauso nuo tyrimo tikslo, tariamos ligos, ligos fazės, tyrimo medžiagos, reakcijos jautrumo ir konkrečios laboratorijos galimybių. Ab, taip pat Ag, nustatymui naudojamos agliutinacijos reakcijos ( RA), pasyvi hemagliutinacija ( RPGA)), imunofluorescencija (REEF), hemagliutinacijos slopinimas ( RTGA), krituliai, flokuliacija, komplemento fiksacijos reakcija (CSC) ir kt.

3) nustatyti serologinę reakciją,

4) serologinės reakcijos registravimas, siekiant nustatyti serologinius infekcijos žymenis.

Įvairioms serologinėms reakcijoms būdinga keletas bendros charakteristikos:

1) kadangi bet kokios serologinės reakcijos yra Ab ir Ar sąveikos reakcijos, visais atvejais, norint nustatyti Ab buvimą tiriamame substrate, reikalingas žinomų standartinių korpuso ar tirpių Ar rinkinys, vadinamas diagnostikos... Savo ruožtu, norint nustatyti Ar, aibės buvimą imuninės diagnostikos serumai,

2) Ar ir Ab sąveika vykdoma tik esant elektrolitui, kuris paprastai naudojamas kaip izotoninis natrio chlorido tirpalas arba buferiniai mišiniai, sistemos pH turėtų būti apie 7,

3) Ag-Ab kompleksui susidaryti reikalingas inkubacinis laikotarpis esant specialioms temperatūros sąlygoms (nuo +4 ° C iki 37 ° C). Specifinio imuninio komplekso susidarymas įvyksta greitai; plika akimi matomas reiškinys (agliutinacija, lizė ir kt.) - lėtai, po kelių valandų ar net dienų,

4) abu serologinės reakcijos komponentai (antigenas ir antikūnai) turi būti lygiaverčiai. Bet kurio komponento perteklius blokuoja Ag-Ab komplekso susidarymą ir prisideda prie klaidingai neigiamų rezultatų.

Serologinės reakcijos užfiksuojamos vizualiai, kartais naudojant padidinamąjį stiklą. Atsižvelgiant į serologinę reakciją, esmė yra sumažinta iki Ag ir Ab prisijungimo reiškinio nustatymo, formuojant Ag-Ab kompleksą. Vizualiai Ag-Ab komplekso susidarymą lydi du pagrindiniai reiškiniai - agliutinacija ir krituliai. Skirtumus tarp jų lemia jiems būdingų antigenų ir antikūnų savybės. Tuo pačiu metu tarp mikrobinių antigenų yra ir tokių, kurie skatina nesodinamų sintezę, Ag-Ab komplekso susidarymas šiuo atveju nėra lydimas nei agliutinacijos, nei kritulių reiškinio, ir norint nustatyti Ag-Ab komplekso susidarymo faktą, reikia pažymėti reakcijos diagnostinį komponentą specialiais ženklais arba perkelti diagnostinį antigeną į kitą agregacijos būseną.

Vertinant reakciją naudojami 3 pagrindiniai kriterijai: 1) reakcijos buvimas ir intensyvumas (pliusais ir pan.); 2) diagnostinis titras, 3) Ab titro padidėjimas ligos eigoje 4 kartus ar daugiau. Reakcijos buvimas nustatomas regėjimo reiškiniais arba imunocheminio žymens surišimu. Serologinės reakcijos intensyvumui įvertinti naudojamas 4 "+" principas (7 lentelė).

7 lentelė.

Sistema serologinėms reakcijoms įvertinti pagal 4 "+" agliutinacijos ir nusodinimo reakcijose

Kiekybiniam serologinės reakcijos rezultatų pateikimui naudojama antikūno arba antigeno titro sąvoka. Norint nustatyti Ab (arba Ar titro) tipą, būtina nustatyti serologinę reakciją, paruošiant kraujo serumo ar kitos medžiagos (titrato) praskiedimų seriją. Ruošiant kraujo serumo praskiedimus, naudojamas elektrolito tirpalas (dažniausiai izotoninis natrio chlorido tirpalas). Skiedimo (titravimo) pakopa nustatoma pagal elektrolito tirpalo tūrio ir kraujo serumo tūrio santykį. Pavyzdžiui, nuosekliai praskiedžiant 2 kartus po pirmąjį mėgintuvėlį, sumaišomi vienodi elektrolito tirpalo ir kraujo serumo tūriai, o 5 kartus - 1 tūris serumo pridedamas prie 4 tūrio dalių elektrolito tirpalo. , atlikdami 10 kartų žingsnį - į 9 tūrius elektrolito tirpalo įpilkite 1 tūrio kraujo serumo (8 lentelė).

Serologinis diagnostinis metodas numato 2 tyrimų sritis: serodiagnostiką (specifinių antikūnų aptikimą tiriamųjų kraujo serume) ir sero identifikavimą (izoliuoto patogeno antigeninių savybių nustatymas siekiant nustatyti jo tipą ir tipą). ).

Serodiagnostikoje naudojamos agliutinacijos, nusodinimo, lizės, CSC reakcijos, reakcijos naudojant žymėtus antigenus ar antikūnus. Šių reakcijų komponentai yra: ištirtų pacientų kraujo serumas ir standartiniai antigeniniai preparatai. Tyrimo tikslas - nustatyti antikūnų prieš infekcinių ligų patogenus titrus tirtuose serumuose.

Aukštų specifinių antikūnų titrų nustatymas, ypač jei jie pasiekia vadinamųjų „diagnostinių“ titrų lygį, patvirtina numanomą diagnozę. Didelė reikšmė teikiama suporuotų serumų tyrimui, kai tuo pačiu metu titruojami serumai, paimti pačioje ligos pradžioje (3–4 dieną), ir 7–10 ligos dieną gauti serumai. 4 kartus padidėjęs antikūnų titras turi diagnostinę vertę.

Atliekant sero identifikavimą, dažniausiai naudojama agliutinacijos reakcija ant stiklo. Reakcijos komponentai: išaugę grynoji kultūra ligos sukėlėjas (antigenas) ir standartiniai diagnostiniai imuninių triušių serumai (antikūnai).

Serologinio metodo orumas- paprastumas, prieinamumas, didelis jautrumas, specifiškumas, greitumas.

Trūkumai: brangių standartinių vaistų ir įrangos poreikis.

Alerginis metodas

Šis metodas numato nustatyti kūno jautrinimą tam tikram infekcijos sukėlėjui, kuris turi didelį diagnostinė vertė... Yra žinoma, kad kai kurių infekcinių ligų eigą formuoja uždelsto tipo padidėjęs jautrumas. Šiuo atžvilgiu mažų alergeno dozių įvedimas į odą tokiems pacientams sukelia atitinkamą organizmo reakciją, kurią sukelia pakartotinis susitikimas su alergenu. Reakcija vyksta pavėluotai, o po 48–72 valandų alergeno injekcijos vietoje atsiranda paraudimas, patinimas ir kartais infiltracija (teigiama reakcija). Jei kūnas nėra jautrinamas, vartojimas į odą nesukels jokios organizmo reakcijos (neigiamos reakcijos). Pramonė gamina specialius odos alerginiams tyrimams skirtus preparatus: tuberkuliną, dizenteriną, bruceliną, tulariną ir kt.

Alerginis metodas ypač didelę reikšmę tais atvejais, kai sunku ar neįmanoma nustatyti infekcinės ligos sukėlėją (pavyzdžiui, sergant raupsais) arba kai tai užtrunka ilgai (pavyzdžiui, sergant brucelioze). Testas su tuberkulinu praktiškai naudojamas ne tik diagnostikos tikslais, bet ir norint nustatyti vaikų pakartotinio skiepijimo BCG vakcina laiką, taip pat tirti kolektyvinį anti-tuberkuliozės imunitetą.

Alergijos metodo privalumai - jo paprastumas, patikimumas, išraiškingumas.

Trūkumas - ribotas vartojimas, nes ne visoms infekcinėms ligoms pasireiškia uždelsto tipo padidėjęs jautrumas.

SEROLOGINĖS REAKCIJOS DIAGNOSTIKOJE

UŽKREČIAMOS LIGOS

Šiuo metu laboratoriniai infekcinių ir neinfekcinių ligų diagnostikai naudojami imunologiniai tyrimo metodai.

Antigenų ir antikūnų sąveikos reakcijos vadinamos serologinėmis (serumas - serumas, logotipai - mokymasis).

Visų serologinių reakcijų esmė yra specifinis antigenų ir juos atitinkančių antikūnų derinys, susidarant kompleksui. Serologinė reakcija yra įmanoma, jei yra imunologinė korespondencija (homologija) - pagrindiniai komponentai - antigenai ir antikūnai. Imunologinis specifiškumas pagrįstas struktūriniu antigeno ir antikūno papildomumu.

Antigenų ir antikūnų sąveikos procesas vyksta dviem fazėmis - specifine ir nespecifine. Pirmasis etapas sparčiai vystosi. Jis susideda iš specifinio aktyvaus antikūno centro sujungimo su atitinkamo (homologinio) antigeno determinantinėmis grupėmis. Sekanti fazė vystosi lėčiau, nespecifinė išorinė apraiška antigeno ir antikūno reakcijos (flokuliacija, drumstumas ir kt.)

Serologiniai tyrimai naudojami dviem tikslais:

1) nustatyti antikūnus tirtame serume naudojant žinomus antigenus (serodiagnostiką);

2) nustatyti nežinomą antigeną naudojant žinomus serumus (sero identifikavimas).

Mikrobiologiniuose tyrimuose nežinomo antigeno nustatymas atliekamas siekiant nustatyti iš subjekto išskirtų patogenų generinius, rūšinius, rūšinius tipus. Tokiais atvejais iš dviejų pagrindinių reakcijos komponentų (antikūnų, antigenų) antigenas nežinomas; reakcija turi būti vykdoma su žinomais antikūnais. Šiuo atveju antigenas yra gryna mikroorganizmų kultūra, išskirta iš bandomosios medžiagos. Imuniniai diagnostiniai serumai naudojami kaip žinomi antikūnai. Pastarieji gaunami iš gyvūnų (dažniausiai triušių) kraujo, anksčiau imunizuoto atitinkamais bakterijų antigenais. Imuniniuose serumuose turėtų būti aukštas lygis specifiniai antikūnai.

Be to, serologiniais tyrimais galima nustatyti įvairius nebakterinius antigenus: nustatyti kraujo grupes, audinių antigenus, navikus, pasirinkti donoro ir recipiento poras organų ir audinių transplantacijai ir kt.

Serologiniai tyrimai taip pat gali būti naudojami antikūnams kraujo serume aptikti. Tokiais atvejais reikalingas žinomas antigenas (diagnosticum). Gyvų ar užmuštų mikrobų suspensijos, jų ekstraktai ar izoliuotos cheminės frakcijos gali būti naudojamos kaip antigenai.

Daugybė serologinių tyrimų, kurie šiuo metu naudojami visuomenės sveikatos praktikoje, skiriasi nuo antigenų ir antikūnų asociacijos. Akivaizdus reakcijos pasireiškimas bus skirtingas, priklausomai nuo to, kokia technika naudojama, kokioje fizinėje būsenoje naudojamas antigenas ar imuninis serumas, ar reakcijoje dalyvauja komplementas. Pavyzdžiui, jei naudojamas korpuskulinis antigenas, atsiranda agliutinacijos reiškinys - dalelių sukibimas (agliutinacijos reakcija). Kadangi dalelių antigenai yra gana didelės dalelės, susidaro matomos flokuliuotos nuosėdos. Jei reakcijoje naudojamas tirpus antigenas, pastebimas smulkių granulių nuosėdų nusėdimas (nusodinimo reakcija). Jei į bakterijų antigenų ir imuninio serumo sąveikos reakciją įvedamas komplementas, įvyksta bakteriolizė (bakterijų antigenų tirpimas) arba eritrocitų lizė (kai jie naudojami kaip antigenas). Imuninių serumų, pažymėtų fluorochromais, fermentais ar radioizotopais, naudojimas serologinėse reakcijose leidžia nustatyti specifinį antigenų prisijungimą prie antikūnų pagal atitinkamą reiškinį (liuminescencija, radioizotopo etiketės spalvos pasikeitimas ar aktyvumas).

Serologinėms reakcijoms įvertinti naudojami tokie kriterijai kaip specifiškumas ir jautrumas. Specifiškumas yra antigenų gebėjimas reaguoti tik su homologiniais antikūnais. Jautrumas yra galimybė specifiškai sąveikauti su minimaliu antigenų ir antikūnų kiekiu.

Agliutinacijos reakcija

Agliutinacijos reakcija (RA) yra specifinė antigenų sąveika su antikūnais, išreikšta antigenų sukibimu veikiant serumo antikūnams ir jų nusėdimui esant elektrolitui. Buvo pirmoji iš siūlomų serologinių reakcijų.

Agliutinacijos reakcijos ypatumas yra tas, kad jos antigenų metu jos ląstelės ar kitos korpuskulinės dalelės yra naudojamos. Reakcija pagrįsta korpusinių ląstelių antigenų gebėjimu specifiškai susijungti su homologiniais imuninių serumų antikūnais, kad susidarytų nuosėdos grūdų, dribsnių, gabalėlių pavidalu. Reakcija vyksta tik esant elektrolitams. Reakcijoje naudojami antigenai vadinami agliutinogenais, antikūnai - agliutininais, o susidariusios nuosėdos - agliutinatu.

Kaip agliutinacijos reakcijos antigenas gali būti naudojama gyvų kultūrų suspensija izotoniniame natrio chlorido tirpale arba mikrobai, užmušti formalino, alkoholio ar kaitinimo būdu, taip pat eritrocitai, leukocitai ar kitos ląstelės.

Antikūnų šaltinis yra žinomas agliutinuojantis serumas, gautas imunizuojant gyvūnus tinkamais antigenais, arba tiriamo paciento serumas.

Egzistuoja Skirtingi keliai nustatant agliutinacijos reakciją. Iš jų dažniausiai naudojamos: orientacijos reakcija ant stiklo, išplėsta agliutinacija mėgintuvėliuose, hemagliutinacija ir netiesioginės hemagliutinacijos reakcijos (RNGA).

Panaši informacija.

Serologiniai tyrimai (testai) — laboratoriniai metodai tyrimai, pagrįsti antikūnų ar antigenų aptikimu paciento biologinėje medžiagoje. Dažniausiai analizei naudojamas kraujas, rečiau - šlapimas, seilės, pūlingos išskyros ar audinių mėginiai, paimti biopsijos metu.

Taikymo sritis

• Kraujo grupės nustatymas.
• Specifinių naviko baltymų nustatymas - naviko žymenys (pavyzdžiui, įtarus kiaušidžių vėžį, prostatos vėžį, Šlapimo pūslė, skrandis ir kt.).
• Virusinių, bakterinių, grybelinių, pirmuoninių infekcijų (ŽIV, sifilio, toksoplazmozės, chlamidijų, raudonukės, herpeso, helmintozės, erkinio encefalito ir kt.) Diagnostika.
• Hormonų, fermentų ir vaistų, esančių tiriamoje biomedžiagoje, nustatymas nedidelėmis koncentracijomis (mažiau nei 10–10 g / l).

Metodo esmė yra serologiniai tyrimai

Serologiniai tyrimai skiriasi savo technika, tačiau visi jie yra antigenų (pašalinių junginių) sąveikos su atitinkamais antikūnais rezultatas. Tyrimą sudaro du vienas po kito einantys etapai. Pirmajai fazei būdinga antigenų ir antikūnų sąveika su imuninių kompleksų susidarymu (teigiama reakcija). Antroje fazėje atsiranda išoriniai požymiai, patvirtinantys šių labai kompleksų buvimą (atsižvelgiant į reakcijos tipą, tai gali būti tiriamojo tirpalo drumstumas, jo spalvos pasikeitimas, dribsnių praradimas ir kt.). Matomų fizinių reiškinių nebuvimas laikomas neigiamu bandymo rezultatu.

Pasirengimas serologiniams tyrimams

Priklauso nuo tyrimo tipo. Medicinos specialistas turėtų pasakyti apie konkretaus testo išlaikymo ypatumus, paskirdamas procedūrą.

Reikiamą serologinį tyrimą galite atlikti klinikoje „Spectra“. Mes užsakome analizes geriausiose didmiesčių laboratorijose, dirbančiose pagal Europos standartus, o tai garantuoja greitus ir patikimus rezultatus. Mūsų gydytojai padės iššifruoti išvadą ir pateiks rekomendacijas tolesnei diagnostikai.

SEROLOGINIAI TYRIMAI(Lotyniškas serumo serumas + graikų logos doktrina) - imunologijos metodai, tiriantys specifines žmogaus ar gyvūno kraujo savybes, siekiant nustatyti antigenus ar antikūnus naudojant serologines reakcijas.

S. pradžia. praėjusio šimtmečio pabaigoje, nustačius, kad antigeno ir antikūno derinys (žr. Antigenas - antikūno reakcija) lydi daugybę regimam stebėjimui galimų reiškinių - agliutinacija (žr.), nusodinimas (žr.) arba lizės. Yra galimybė specifiškai atpažinti antigenus (žr.) Arba antikūnus (žr.), Jei yra žinomas vienas iš šių komponentų.

1897 m. F. Vidalas pranešė, kad vidurių šiltine sergančių pacientų kraujo serumas selektyviai agliutinuoja vidurių šiltinės bakterijas, todėl ši reakcija (žr. Vidalo reakciją) gali būti naudojama laboratorijoje. vidurių šiltinės diagnostika. Tais pačiais metais buvo įrodyta, kad maro, vidurių šiltinės ir choleros bakterijų kultūrų filtratai, kartu su atitinkamais imuniniais serumais, sudaro dribsnius arba nusėda.

Nusodinimo reakcija pasirodė tinkama baltymų antigenams aptikti. 1900–1901 m. K. Landsteineris nustatė, kad žmonių eritrocituose yra du skirtingi antigenai (A ir B), o kraujo serume - du agliutininai (a ir P), kurie prisidėjo prie hemagliutinacijos reakcijos panaudojimo kraujo grupėms nustatyti (žr.) .

Agliutinacijos reakcija kraujo grupei ir Rh faktoriui nustatyti naudojama akušerinėje praktikoje, atliekant kraujo perpylimą ir audinių transplantaciją. Antikūnai prieš Rh faktorių (žr.) Yra neišsamūs antikūnai, jie negali tiesiogiai reaguoti su Rh teigiamais eritrocitais, todėl jiems aptikti naudojama Kumbso reakcija (žr. Kumbso reakciją), pagrįsta neišsamių nustatymu. antikūnai, naudojant antiglobulino serumus. Tiriamasis kraujo serumas pridedamas prie žinomo specifiškumo eritrocitų, po to antiglobulino serumas prieš IgG (netiesioginė Kumbso reakcija). Nebaigtų analizuoto kraujo serumo antikūnų Fab fragmentai jungiasi su eritrocitais, o anti-IgG antikūnai - su laisvais šių antikūnų Fc fragmentais, o eritrocitai agliutinuojasi. Hemolizinei anemijai diagnozuoti naudojama tiesioginė Kumbso reakcija. Tokių pacientų organizme eritrocitai yra derinami su antikūnais prieš kraujyje cirkuliuojantį Rh faktorių. Norint juos identifikuoti, iš paciento paimtų eritrocitų pridedami antikūnai prieš IgG. Eritrocitų agliutinacijos atsiradimas patvirtina ligos diagnozę.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija - RTGA (žr. Hemagliutinaciją) - pagrįsta virusų eritrocitų hemagliutinacijos prevencijos (slopinimo) imuninio serumo reiškiniu. Virusinės hemagliutinacijos reiškinys nėra serolis. reakcija ir atsiranda dėl viruso ryšio su eritrocitų receptoriais, tačiau RTGA yra serologinė reakcija, naudojama antivirusiniams antikūnams aptikti ir titruoti. RTGA yra pagrindinis gripo, tymų, raudonukės, kiaulytės, erkinio encefalito ir kitų virusinių infekcijų serodiagnostikos metodas, kurio sukėlėjai pasižymi hemagliutinacinėmis savybėmis.

Pasyvios arba netiesioginės hemagliutinacijos reakcija. Jame naudojami eritrocitai arba neutrali sintetinė chemija (pavyzdžiui, latekso dalelės), ant kurių paviršiaus yra sorbuojami antigenai (bakteriniai, virusiniai, audiniai) ar antikūnai (žr. Boydeno reakciją). Jų agliutinacija įvyksta pridedant atitinkamų serumų ar antigenų. Antigenais įjautrinti eritrocitai vadinami antigenine eritrocitų diagnostika ir naudojami antikūnams aptikti ir titruoti. Antikūniais įjautrinti eritrocitai yra vadinami imunoglobulino eritrocitų diagnostikais (žr.) Ir naudojami antigenams aptikti:

Pasyvi hemagliutinacijos reakcija naudojama diagnozuoti bakterijų sukeltas ligas (vidurių šiltinė ir paratifas, dizenterija, bruceliozė, maras, cholera ir kt.), Pirmuonis (maliarija) ir virusus (gripas, adenovirusinės infekcijos, erkinis encefalitas, Krymo hemoraginė karštinė). ir pan.) ... Pasyviosios hemagliutinacijos reakcija į jautrumą yra ne mažesnė už viruso išskyrimo metodą sergant arenovirusinėmis ligomis (žr.), Ypač esant limfocitiniam choriomeningitui. Limfocitinio choriomeningito virusinis antigenas aptinkamas viruso nešiotojose (naminėse pelėse) pasyvios hemagliutinacijos reakcijos metu, ištrauktų organų suspensijomis, praskiestomis dešimtis tūkstančių kartų. Sergant salmonelioze, bakterijos pasyvioje hemagliutinacijos reakcijoje nustatomos iki kelių šimtų mikrobinių kūnų koncentracijos 1 g išmatų, dizenterijos bakterijos maisto produktai yra aptinkami, kai 1 g medžiagos yra mažiausiai 500 mikrobų kūnų.

Pasyvioji hemagliutinacijos reakcija naudojama diagnozuojant ir profilaktiškai virusinį hepatitą B. Sovietų Sąjungoje, norint nustatyti HBs antigeną (žr. Australijos antigeną) pacientų, sergančių ūmiu hepatitu B, kraujyje, atliekama diagnostinė diagnostika - vištienos eritrocitai. jautrinamas ožkos imunoglobulinu prieš HBs antigeną. Diagnostikos lašas derinamas su vienodu tirtų žmonių kraujo serumo kiekiu, o jei jame yra HBs antigeno, įvyksta agliutinacija. Reakcija sugeba iki 1,5 ng / ml HBs antigeno. HBs antikūnams aptikti naudojami eritrocitai su HBs antigenu, išskirti iš pacientų kraujo, ant jų sorbuoti. Pasyvi hemagliutinacijos reakcija taip pat naudojama paciento padidėjusiam jautrumui vaistams ir hormonams, pavyzdžiui, penicilinui ar insulinui, nustatyti. Šiuo atveju žmogaus 0 kraujo grupės eritrocitai įjautrinami vaistu ir vėliau naudojami aptikti agliutininus paciento kraujo serume.

Pasyvi hemagliutinacijos reakcija naudojama norint nustatyti gonadotropinį hormoną šlapime, siekiant nustatyti nėštumą (žr. Chorioninis gonadotropinas). Tam standartinis šio hormono serumas inkubuojamas su tiriamu šlapimu. Vėliau pridedant eritrocitų su ant jų sorbuotu hormonu, agliutinacija nevyksta (teigiamas atsakas), nes šlapime esantis hormonas neutralizuoja agliutinuojančius antikūnus.

Reakcijos, pagrįstos kritulių reiškiniu

Jie naudojami įvairiausiems antigenams ir antikūnams aptikti. Paprasčiausias kokybinės reakcijos pavyzdys yra neskaidrios nusodinimo juostos susidarymas ties antigeno ir antikūno nusėdimo riba mėgintuvėlyje. Plačiai naudojami įvairių tipų kritulių reakcijos pusiau skystuose agaro ar agarozės geliuose (dvigubos imunodifuzijos metodas pagal Ouchterloną, radialinės imunodifuzijos metodas, imunoelektroforezė), rugiai yra kokybiniai ir kiekybiniai (žr. Imunodifuzija, Immunoelektroforezė).

Norint nustatyti dvigubą imunodifuziją, ant stiklo plokštės pilamas ištirpinto gelio sluoksnis ir, sukietėjus, išpjaunami 1,5–3 mm skersmens šuliniai. Tiriamieji antigenai dedami į šulinius, esančius ratu, o žinomo specifiškumo imuninis serumas dedamas į centrinį. Difuzuodami vienas kito atžvilgiu, homologiniai serumai ir antigenai sudaro nuosėdas. Esant radialinei imunodifuzijai (Mancini metodu), imuninis serumas pridedamas prie agaro. Ant šulinių įdėtas antigenas difunduoja per agarą, o dėl nusodinimo imuniniu serumu aplink duobutes susidaro nepermatomi žiedai, kurių išorinis skersmuo yra proporcingas antigeno koncentracijai. Šios reakcijos modifikacija naudojama diagnozuojant gripą, siekiant atpažinti IgM ir IgG antikūnus (žr. „Immunoglobulinai“). Ant agaro pridedamas gripo antigenas, o į šulinius - kraujo serumas. Tada plokštelės apdorojamos imuniniais serumais nuo IgM ar IgG antikūnų, o tai padeda nustatyti atitinkamų antikūnų reakciją su antigenais. Šis metodas leidžia vienu metu nustatyti antikūnų titrus ir jų priklausymą tam tikrai imunoglobulinų klasei.

Imunelektroforezės tipas yra radioimunoforezė. Šiuo atveju, elektroforetiškai atskyrus antigenus į griovelį, supjaustytą lygiagrečiai antigenų judėjimui gelyje, pirmiausia užpilta radioaktyviuoju jodu pažymėtu imuniniu serumu prieš nustatytus antigenus, o po to - imuninio serumo prieš IgG antikūnus, susidariusio antikūno kraštus. -antigenų kompleksai nusėda. Visi nesurišti reagentai nuplaunami, o antigeno ir antikūno kompleksas nustatomas autoradiografijos būdu (žr.).

Reakcijos, susijusios su komplementu. Reakcijos, susijusios su komplementu (žr.), Grindžiamos komplemento subkomponento Cl (Clq) ir tada kitų komplemento komponentų gebėjimu prisijungti prie imuninių kompleksų.

Komplemento fiksavimo reakcija leidžia titruoti antigenus ar antikūnus pagal komplemento fiksavimo laipsnį antigeno-antikūno kompleksu. Ši reakcija susideda iš dviejų fazių: antigeno sąveika su tirtu kraujo serumu (tyrimo sistema) ir hemolizinio serumo sąveika su avių eritrocitais (indikatorių sistema). Jei reakcija teigiama, komplementas surišamas į bandymo sistemą, o tada, pridedant antikūnų, įjautrintų eritrocitus, hemolizė nepastebima (žr. Komplemento surišimo reakciją). Reakcija plačiai naudojama visceralinio sifilio (žr. Wassermano reakciją) ir virusinių infekcijų (žr. Virologiniai tyrimai) serodiagnostikai.

Citolizė. Antikūnai prieš ląstelių struktūras, dalyvaujant komplementui, gali ištirpinti ląsteles, kurios nešioja šias struktūras. Eritrocitų lizę galima lengvai įvertinti pagal hemoglobino išsiskyrimo laipsnį ir intensyvumą. Branduolinių ląstelių lizė vertinama apskaičiuojant negyvų ląstelių, kurios nėra nudažytos metileno mėlyna, procentinę dalį. Taip pat dažnai naudojamas radioaktyvus chromas, kuris iš anksto chemiškai sujungiamas su ląstelėmis. Sunaikintų ląstelių skaičių lemia neprisijungusio chromo kiekis, išsiskyręs ląstelių lizės metu.

Gelyje gali atsirasti eritrocitų radialinės hemolizės reakcija. Avino eritrocitų suspensija dedama į agarozės gelį su pridėtu komplementu; ant stiklo sustingusiame sluoksnyje padaromos skylės ir į jas įvedamas hemolizinis serumas. Dėl radialinės antikūnų difuzijos aplink duobutes susidarys hemolizės zona. Hemolizės zonos spindulys yra tiesiogiai proporcingas serumo titrui. Jei sorbuojate antigeną ant eritrocitų, pavyzdžiui, gripo viruso, raudonukės ar erkinio encefalito, glikoproteino hemagliutinino, galite pakartoti hemolizės reiškinį imuniniais serumais nuo šių virusų. Radialinės hemolizės reakcija gelyje buvo pritaikyta diagnozuojant virusines infekcijas dėl jos nustatymo paprastumo, nejautrumo serumo inhibitoriams ir galimybės titruoti kraujo serumą išilgai hemolizės zonos skersmens, nenaudojant serijinių skiedimų.

Imuninis sukibimas. Raudonieji kraujo kūneliai, trombocitai ir kiti kraujo kūneliai turi receptorius trečiajam komplemento komponentui (C3). Jei antigenas (bakterijos, virusai ir kt.) Pridedamas atitinkamas imuninis serumas ir komplementas, susidaro antigeno-antikūno kompleksas, padengtas komplemento C3 komponentu. Sumaišius su trombocitais, dėl komplemento C3 komponento, antigeno-antikūno kompleksas nusėda ant ląstelių ir paskatins jas agliutinuotis (žr. „Imuninis sukibimas“). Ši reakcija naudojama HLA sistemos antigenams nustatyti (žr. Imunitetą transplantacijai) ir tiriant skaičių virusinės infekcijos(erkinis encefalitas, dengės karštinė), rugius lydi imunopatolis. virusų antigenų procesai ir cirkuliacija kraujyje kartu su antikūnais.

Neutralizavimo reakcija pagrįsta antikūnų gebėjimu neutralizuoti tam tikras specifines makromolekulinių ar tirpių antigenų funkcijas, pavyzdžiui, fermentų aktyvumą, bakterinius toksinus, virusų patogeniškumą. Bakteriologijoje ši reakcija naudojama aptikti antistreptolizinus, antistreptokinazę ir antistafilolizinus. Toksinų neutralizavimo reakciją galima įvertinti bioliu. poveikis, taigi, pavyzdžiui, titruokite antitetaną ir antibotulininius serumus (žr. Toksinas - antitoksino reakcija). Gyvūnams suleistas toksino ir antiserumo mišinys apsaugo nuo jų mirties. Įvairūs variantai neutralizavimo reakcijos naudojamos virusologijoje. Sumaišius virusus su atitinkamu antiserumu ir įvedant šį mišinį gyvūnams ar ląstelių kultūroms, virusų patogeniškumas neutralizuojamas.

Reakcijos naudojant chemines ir fizines žymes

Serolui naudojama imunofluorescencija, sukurta A. N. Coons 1942 m. fluorochromu pažymėto serumo reakcijos (žr. Imunofluorescencija). Serumas, pažymėtas fluorochromu, sudaro antigeno-antikūno kompleksą su antigenu, to-ry tampa stebimas mikroskopu ultravioletiniais spinduliais, sužadinančiais fluorochromo spindesį. Tiesioginė imunofluorescencijos reakcija naudojama ląstelių antigenams tirti, virusui užkrėstose ląstelėse nustatyti ir bakterijoms bei riketsijai aptikti tepinėliuose. Taigi pasiutligės diagnozei nustatyti gyvūnų, įtariamų virusu, smegenų gabalų atspaudai apdorojami liuminescenciniu pasiutligės serumu. Gavus teigiamą rezultatą, nervinių ląstelių protoplazmoje pastebimi ryškiai žalios spalvos gumulai. Ekspresinė gripo, paragripo ir adenoviruso infekcijos diagnostika pagrįsta viruso antigenų aptikimu atspaudų iš nosies gleivinės ląstelėse.

Netiesioginės imunofluorescencijos metodas yra plačiau naudojamas, remiantis antigeno-antikūno komplekso nustatymu, naudojant liuminescuojantį imuninį serumą prieš IgG antikūnus, ir naudojamas aptikti ne tik antigenus, bet ir titruojančius antikūnus. Šis metodas pritaikytas herpeso, citomegalipo ir Lassa karštinės serodiagnostikoje. Laboratorijoje antigenų turinčių ląstelių preparatų atsargos turėtų būti laikomos -20 ° C temperatūroje, pavyzdžiui, ant plonų stiklo gabalų užaugintos VERO ląstelės, užkrėstos virusu arba vištienos fibroblastais, užfiksuotais acetonu. Tiriamasis kraujo serumas yra sluoksniuojamas ant preparatų, preparatas dedamas į termostatą f 37 ° temperatūroje, kad susidarytų imuniniai kompleksai, o po to, išplaudami nesurištus reagentus, šie kompleksai nustatomi pažymėtu liuminescuojančiu serumu nuo žmogaus globulinų. Naudojant žymėtus imuninius serumus prieš IgM arba IgG antikūnus, galima atskirti antikūnų tipą ir nustatyti ankstyvą imuninį atsaką, esant IgM antikūnams.

Fermentiniame imunologiniame metode naudojami antikūnai, konjuguoti su fermentais, Ch. arr. krienų peroksidazė arba šarminė fosfatazė. Norint nustatyti paženklinto serumo junginį su antigenu, pridedamas substratas, kurį skaido fermentas, prijungtas prie serumo, geltonos-rudos (peroksidazės) arba geltonai žalios (fosfatazės) spalvos. Jie taip pat naudoja fermentus, kurie skaido ne tik chromogeninį, bet ir lumogeninį substratą. Tokiu atveju su teigiama reakcija atsiranda švytėjimas. Kaip ir imunofluorescencija, fermentinis metodas naudojamas antigenams ląstelėse aptikti arba antikūnams ant antigeną turinčiose ląstelėse titruoti.

Populiariausias fermento-imunologinio metodo tipas yra imunosorbcija. Ant kieto nešiklio, kuris gali būti celiuliozė, poliakrilamidas, dekstranas ir įvairūs plastikai, jie sorbuoja antigeną. Dažniausiai nešiklis yra mikropanelio šulinių paviršius. Tiriamasis kraujo serumas pridedamas prie duobučių su sorbuotu antigenu, tada su fermentu pažymėtu antiserumu ir substratu. Į teigiamus rezultatus atsižvelgiama pasikeitus skystos terpės spalvai. Antigenams aptikti antikūnai sorbuojami ant nešiklio, tada į duobutes pridedama tiriamoji medžiaga ir reakcija plėtojama fermentu pažymėtu antimikrobiniu serumu.

Radioimunologinis metodas pagrįstas antigenų ar antikūnų radioizotopo etiketės naudojimu. Iš pradžių jis buvo sukurtas kaip specifinis kraujyje cirkuliuojančių hormonų lygio matavimo metodas. Tiriamoji sistema buvo izotopu pažymėtas hormonas (antigenas) ir jo antiserumas. Jei į tokį antiserumą pridedama medžiaga, kurioje yra norimo hormono, ji suriša dalį antikūnų; vėliau įvedus žymėtą titruotą hormoną, sumažėjęs jo kiekis prisijungs prie antikūnų, palyginti su kontrole. Rezultatas vertinamas lyginant surištos ir nesurištos radioaktyviosios etiketės kreives. Šis metodas vadinamas konkurencine reakcija. Yra ir kitų radioimunologinio tyrimo metodo modifikacijų. Radioimunologinis tyrimo metodas yra jautriausias antigenų ir antikūnų nustatymo metodas, naudojamas hormonams nustatyti, vaistinių medžiagų ir antibiotikai, skirti diagnozuoti bakterines, virusines, riketines, pirmuonines ligas, tirti kraujo baltymus, audiniu antigenus.

Serologinių tyrimų metodų lyginamosios charakteristikos ir naudojimas medicinos praktikoje

S. metodai ir. yra nuolat tobulinami naudojimo jautrumo ir universalumo didinimo kryptimi. Iš pradžių serolis. diagnozė buvo pagrįsta antikūnų nustatymu. Atsiradus XX amžiaus viduryje. imunofluorescencijos ir pasyvios hemagliutinacijos reakcijos, kurios yra jautresnės, tapo įmanoma aptikti ne tik antikūnus, bet ir antigeną tiesiogiai pacientų medžiagoje. Fermentiniai imunologiniai ir radioimunologiniai metodai, kurių jautrumas yra 2-3 laipsniais didesnis nei imunofluorescencija ir pasyvi hemagliutinacija, artėja prie biolo metodų. bakterijų ir virusų aptikimas. Teoriškai jų taikymo sritis tiek antigenams, tiek antikūnams aptikti yra neribota.

Serodiagnostikos inf. ligos pagrįstos antikūnų atsiradimu prieš izoliuotą ar įtariamą patogeną, neatsižvelgiant į tai, ar patogenas buvo aptiktas ūminė stadija liga. Ištirkite kraujo serumų poras, paimtas ligos pradžioje ir 2–3 savaites. vėliau. Antikūnų padidėjimas antrame kraujo serume mažiausiai 4 kartus, palyginti su pirmuoju, yra diagnostiškai reikšmingas. Taip pat svarbu, kokia imunoglobulinų antikūnų klasė yra. IgM antikūnai nustatomi ūmaus ligos laikotarpio pabaigoje ir Ankstyva stadija pasveikimas. IgG antikūnai atsiranda vėlesniame pasveikimo etape ir ilgai cirkuliuoja. Jei nustatoma, kad per pirmąjį nėštumo trimestrą moteris turi raudonukės viruso IgM antikūnų, tai yra nėštumo nutraukimo pagrindas, nes šiuo laikotarpiu vaisius yra ypač jautrus virusui. Su skirtingais inf. ligų, specifiškiausi ir patogiausi metodai naudojami pasirinktinai.

Smėlis. plačiai naudojama epidemiologijoje. Sistemingas kraujo mėginių rinkimas ir tyrimas skirtingų grupių gyventojų leidžia suprasti gyventojų kontaktus su patogenų šaltiniu inf. ligų. Bandos imuniteto lygio tyrimas leidžia nustatyti didelės rizikos grupes ir planuoti vakcinacijos veiklą, ištirti infekcijų geografinį paplitimą. Smėlis. įvairūs amžiaus grupės gyventojų leido, pavyzdžiui, retrospektyviai nustatyti skirtingų gripo viruso variantų cirkuliaciją tam tikru laikotarpiu.

Smėlis. yra labai svarbūs tiriant paveldimas ligas (žr.) ir autoimunines ligas kartu su audinių ir organų specifinių antikūnų atsiradimu, kurie sunaikina atitinkamas tikslines ląsteles, taip pat onkologijoje naviko antigenams aptikti. Taigi kepenų vėžio imunodiagnostika remiasi alfa-fetoproteinų ir kitų embrioninių antigenų nustatymu pacientų kraujo serume imunodifuzijos ir radioimunologiniais metodais.

Didelė mokslinė pažanga tiriant ląstelių antigenų, bakterijų antigenų ir virusų antigeninę struktūrą pasiekiama dėl serolio vartojimo. monokloninių antikūnų reakcijos į rugius gali būti atskiriamos nuo antigeno determinantų.

Bibliografija: Tyrimo metodai imunologijoje, red. I. Lefkovits ir B. Pernis, vert. iš anglų kalbos, M., 1981; Imunologijos vadovas, red. O. E. Vyazovas ir Š. X. Khodzhaeva, M., 1973; Klinikinės rekomendacijos laboratorinė diagnostika, red. V. V. Menšikovas, M., 1982; Imunologija, red. pateikė J.-F. Bachas, N. Y., 1978 m.

S. Ya. Gaidamovičius.