Biocheminės savybės dažniausiai būdingi genčiai Salmonelės. Skiriamieji bruožai yra šie: dujų susidarymo nebuvimas fermentuojant S. Typhi, S. Paratyphi A nesugebėjimas gaminti vandenilio sulfido ir dekarboksilato lizino.

Epidemiologija.Vidurių šiltinė ir paratifas yra antroponozės, t. sukelti ligas tik žmonėms. Infekcijos šaltinis yra ligonis arba bakterijų nešiotojas, kuris išmatomis, šlapimu, seilėmis išskiria ligos sukėlėją į išorinę aplinką. Šių infekcijų sukėlėjai, kaip ir kitos salmonelės, yra atsparūs išorinėje aplinkoje, išlieka dirvožemyje ir vandenyje. S. Typhi gali transformuotis į nedirbamą formą. Jų reprodukcijai palanki aplinka yra maisto produktai(pienas, grietinė, varškė, malta mėsa, želė). Ligos sukėlėjas perduodamas vandeniu, kuris šiuo metu vaidina svarbų vaidmenį, taip pat maisto ir kontaktiniais-buitiniais keliais. Infekcinė dozė yra maždaug 1000 ląstelių. Natūralus žmonių imlumas šioms infekcijoms yra didelis.

Patogenezė ir klinikinis vaizdas. Užėjęs plonoji žarna, vidurių šiltinės ir paratifo patogenai įsiskverbia į gleivinę, kai

naudojant efektorinius baltymus ТТСС-1, pagrindinį infekcijos židinį formuojant Peyerio pleistruose. Reikėtų pažymėti, kad osmosinis slėgis submucozoje yra mažesnis nei žarnyno spindyje. Tai skatina intensyvią Vi-antigeno sintezę, kuri padidina patogeno antifagocitinį aktyvumą ir slopina submucozės ląstelių uždegimą skatinančių audinių mediatorių išsiskyrimą. To pasekmė - uždegiminio viduriavimo išsivystymas pradinėse infekcijos stadijose ir intensyvus mikrobų dauginimasis makrofaguose, sukeliantis Peyerio pleistrų uždegimą ir limfadenito išsivystymą, dėl kurio pažeidžiama barjerinė mezenterio funkcija. limfmazgiai ir salmonelių įsiskverbimas į kraują, sukeliantis bakteremiją. Tai sutampa su inkubacinio laikotarpio pabaiga, kuri trunka 10–14 dienų. Bakteremijos metu, lydinčiame visą karščiavimą, vidurių šiltinės ir paratifo karštinės sukėlėjai su kraujo tekėjimu išplito visame kūne, nusėdę parenchiminių organų retikuloendoteliniuose elementuose: kepenyse, blužnyje, plaučiuose, taip pat kaulų čiulpuose, kur jie daugintis makrofaguose. Iš Kupfferio kepenų ląstelių Salmonella per tulžies latakus, į kuriuos jie difunduoja, patenka į tulžies pūslę, kur taip pat dauginasi. Kaupiasi tulžies pūslė, Salmonelės sukelia uždegimą ir vėl užkrėstų plonąją žarną tulžies srove. Pakartotinai įvedus salmonelių į Peyerio pleistrus, išsivysto hipererginis uždegimas, pvz., Arthus reiškinys, jų nekrozė ir opa, o tai gali žarnyno kraujavimas ir žarnos sienelių perforacija. Vidurių šiltinės ir paratifo karštinės sukėlėjų gebėjimas išgyventi ir daugintis fagocitinėse ląstelėse su pastarųjų funkciniu nepakankamumu lemia bakterijų nešėjų susidarymą. Salmonelės taip pat gali ilgai išlikti tulžies pūslėje, ilgą laiką išsiskiria su išmatomis ir užteršti aplinką. 2-osios ligos savaitės pabaigoje ligos sukėlėjas pradeda išsiskirti iš organizmo su šlapimu, vėliau - su motinos pienu. Viduriavimas prasideda 2-osios ar 3-osios ligos savaitės pabaigoje, nuo tada ligos sukėlėjai sėjami iš išmatų.

PRIVATI MIKROBIOLOGIJA

Normalios mikrofloros tyrimo metodai

Normaliai mikroflorai tirti naudojami du metodai; bakterioskopinis ir bakteriologinis.

Bakterioskopinis metodas. Tai turi labai didelę nepriklausomybę tiems žmogaus kūno biotopams, kuriuose gyvena daugybė skirtingų tipų mikroorganizmų (burnos ertmė, žarnos, makštis). Tai leidžia jums gauti bendrą idėją apie mikrofloros sudėtį (gramo / + arba gramo / - vienos ar kitos formos bakterijų - kokų, diplokokų, streptokokų, bacilų, bacilų, streptokokų, fusiforminių bakterijų, vyraujančios bakterijos) buvimas grybelių ir kt.), taip pat nustatyti tuos mikroorganizmus, kurių negalima auginti maistinėse terpėse. Bakteriologinis metodas. Naudojamas biotopams su Didelis pasirinkimas mikroorganizmai (burnos ertmė, žarnos, makštis) atliekami atsižvelgiant į bakterioskopijos duomenis.

Pagrindiniai bakteriologinių tyrimų principai:

a) kokybinės (rūšinės sudėties) ir kiekybinės naudojimas

(skirtingų rūšių kiekybinis santykis) mikrofloros įvertinimas; 6) pirminė medžiagos sėja be išankstinio sodrinimo, nes

sodrinimas pažeidžia kiekybinius rūšių santykius; c) didelio įvairių maistinių terpių rinkinio naudojimas, pasirinkimas

auginimo sąlygos (aerobinė, anaerobinė, CO2 atmosfera ir kt.). Medžiagos tyrimo metodai:

1. Natūralių išskyrų (seilių, šlapimo ir kt.) Gavimas.

2. Replikos metodas; a) atspaudai ant agaro terpės paviršiaus, b) atspaudai ant marlės-agaro plokštelių.

3. Skalavimo būdas sudrėkintu tamponu.

4. Aspiracijos metodas (iš tarpdančių, dantenų kišenių, iš viršutinės ir vidurinės sekcijos kvėpavimo takai, aspiracija ant filtrų).

5. Zondų įvedimas į žarnyną.

6. Taikymo būdas - mikroorganizmų pašalinimas naudojant tam tikro ploto popierines ar audinių plokšteles.

Pneumokokas (Streptococcus pneumoniae) yra gramteigiamas lancetinis diplokokas, turi polisacharidinę kapsulę. Jis auginamas terpėje su baltymu, kurio pH yra 7,6 (5% kraujo agaro), susidaro mažos (vidutinės) suplotos kolonijos su a-hemolize. Jis geriau auga, kai oras yra prisotintas CO. Jis turi 84 variantus pagal K-antigeno tipą. Jautrus chemikalams ir fiziniai veiksniai ypač į tulžies druskas (lizę), optochiną, NaCl. Pneumokoko patogeniškumo faktoriai yra kapsulė, hialuronidazė, neuraminidazė, IgA egzoproteazė, O-pneumolizinas, leukocidinas. Patogeniškas baltosioms pelėms. Pneumokokas sukelia ūminį ir lėtinės ligos kvėpavimo takai (sinusitas, bronchitas, pneumonija), meningitas, sepsis, uždegiminės ligos, šliaužianti ragenos opa. Medžiaga diagnostiniai tyrimai vartoti atsižvelgiant į pneumokokinės infekcijos formą: pavyzdžiui, sergant plaučių uždegimu - skrepliais, su sepsiu - krauju, pūlinga liga - pūliais, su vidurinės ausies uždegimu - išskyromis iš ausies kanalo ir kt. Prieš pradedant gydymą etiotropiniu būdu, svarbu paimti medžiagą.

Serumas tiriamas antikūnams nustatyti.

Su tikslu laboratorinė diagnostika taikyti šiuos metodus.

Aš Express metodai(patogeno aptikimas patologinėje medžiagoje):

1. Mikroskopinis apžiūra - tepinėlis iš patologinės medžiagos su Gramo dėmėmis. Gramteigiamų kapsulinių diplokokų nustatymas.

2. Kapsulės antigeno nustatymas reakcijoje „Kapsulės patinimas“ (pagal Neifeldą - kapsulės dydžio padidėjimo reiškinys, esant polivalentiniam antikapsulės serumui). Pastarasis tepamas ant bandomosios medžiagos tepinėlio; apskaita naudojant fazinio kontrasto mikroskopą.

3. Antigeno nustatymas serume arba smegenų skystyje (RSK, latekso agliutinacija, priešinė imunoelektroforezė). „Express“ metodai dažniausiai yra orientaciniai, nes:

a) ne visada pneumokoko nustatymas rodo jo etiologinį vaidmenį (dažnai vežimas);

b) prasidėjus etiotropiniam gydymui, ligos sukėlėjas nenustatomas.

II. Kultūrinis (bakteriologinis) metodas:

1 etapas. Medžiaga (ne vėliau kaip per 1-2 valandas nuo mėginio paėmimo momento) užkrėsta 5% kraujo agaru, kultivuojama eksikatoriuje su žvake (CO2) 20–24 valandas 37 ° C temperatūroje;

2 etapas. Pasirinktos įtartinos kolonijos, atliekančios a-hemolizę, mikroskopinės (Gramo dėmė, vienoje kapsulėje), persijotos į išrūgų sultinį;

3 etapas. Nustatykite kultūros grynumą (Gramo dėmė). Identifikavimas atliekamas morfologinėmis, serologinėmis (p. Agliutinacija ant stiklo su daugiavalentiu antikapsuliniu serumu), kultūrinėmis, biologinėmis savybėmis. Pastarieji atliekami sėjant į terpę su optoquin (be augimo), 10% tulžies sultinyje (lizė), pelių intraperitonine infekcija (mirtis). Jei reikia (pavyzdžiui, sergant plaučių uždegimu), įrodoma pneumokoko etiologinė reikšmė (visų pirma nustatomas CFU / ml). Taip pat nustatomas jautrumas antibiotikams. Kultūros metodas yra pagrindinis diagnostikos metodas, nes jis yra ankstyvas, tikslus, jautrus ir leidžia pasirinkti tinkamą etiotropinį gydymą.

III. Serologinis metodas: antikapsulinių antikūnų ir jų dinamikos kraujo serume nustatymas naudojant RNIF (su auto kamienais), RSK ir RIGA (su etaloninėmis pneumokokų padermėmis). Dažniau naudojamas lėtinės formos ah infekcija. Metodo taikymą riboja vėlesni rezultato gavimo terminai ir paruoštos diagnostikos nebuvimas.

IV. Biologinis metodas: baltųjų pelių intraperitoninė infekcija tiriamąja medžiaga (dažniausiai skrepliu). Negyvos pelės atidaromos, tepami tepalai, ant kraujo agaro pasėjami atspaudai, kraujas ir organai, paskui nustatomas patogenas. Metodas yra pagalbinis, ribojamas darbštumo, kitų tipų mikroorganizmų, patogeniškų pelėms, buvimo medžiagoje, mažo pelių jautrumo kai kuriems pneumokoko serovarams.

Daugeliu atvejų pneumokokinė pneumonija išsivystyti išsiurbus seilių, kuriose yra S. pneumoniae. Tada pneumokokinės bakterijosįsiskverbti į apatiniai skyriai kvėpavimo takai. Būtina sutrikdyti apsauginius drenažo mechanizmus - kosulio impulsą ir mukociliarinį klirensą. Susidarius galingiems uždegiminiams infiltratams, sutrinka plaučių audinio homeostazė. Infekcijos su virulentiškiausiu 3 serovaru gali būti susiformavusios ertmės plaučių parenchimoje.

Nuo pirminio pneumokoko židinio gali prasiskverbti į pleuros ertmę ir perikardą arba išplisti hematogeniškai ir sukelti meningitą, endokarditą ir sąnarių pažeidimus.

Patogeniniai pneumokoko faktoriai

Pagrindiniai veiksniai pneumokoko patogeniškumas apsvarstykite kapsulę ir medžiagą C.

Pneumokoko kapsulė- pagrindinis virulentiškumo faktorius. Jis apsaugo bakterijas nuo mikrobicidinio fagocitų potencialo ir opsoninų veikimo. Nekapsuliuojamos pneumokoko atmainos yra praktiškai avirulentiškos, jų retai randama. Didžioji dalis antipneumokokinių AT yra AT – AG kapsulės.

C medžiagos pneumokokas- ląstelės sienelės teichoinė rūgštis, turinti cholino ir sąveikaujanti su C reaktyviuoju baltymu. Tokio atsako pasekmė yra papildomos kaskados suaktyvėjimas ir ūminės uždegimo fazės mediatorių išsiskyrimas. Jų kaupimasis plaučių audinyje stimuliuoja polimorfonuklearinių fagocitų migraciją.

Pneumokokai (sinonimas: Pneumococcus Talamon - Frankel, Streptococcus lanceolatus Pasteur, Micrococcus pneumoniae, Diplococcus pneumoniae Frankel, Streptococcus pneumoniae) yra lancetiniai diplokokai, išskiriami žmogaus pneumonijoje. 1881 m. Atrado L. Pasteur ir savarankiškai G. M. Sternbergas JAV. Pneumokokų etiologinį ryšį su žmogaus plaučių uždegimu Frenkelis ir Weichselbaumas (A. Frankelis, A. Weichselbaumas) nustatė 1884 m.

Pneumokokai, išskirti iš žmogaus ar gyvūno kūno, yra ovalūs arba lancetiški kokai, išsidėstę poromis; nudažytas teigiamai pagal Gramą, apie 1 mikroną. Kiekvieną porą supa stora kapsulė, aptinkama dažant eozinu [T. J. Mackie, J. E. McCartney]. Pneumokokai dažniausiai auga ant dirbtinės kultūros terpių grandinių pavidalu. Pneumokokų grandinė paprastai yra trumpesnė nei pyogeninio streptokoko. Kultūrose pneumokokai yra mažiau lancetiški ir apvalesni, nejudantys ir nesudaro sporų. Kapsulė pneumokoke yra aiškiai matoma preparatuose iš gyvūnų ir žmonių eksudatų, kai auga ant maistinių terpių, į kurias pridedamas kraujas, kraujo serumas ar ascitinis skystis, tačiau ji blogai matoma augant ant įprastų maistinių medžiagų. Pneumokokai yra aerobai arba fakultatyviniai anaerobai, lengvai dažomi paprastais anilino dažais ir teigiami gramui, nors senose kultūrose jie tampa gramneigiami.

Pneumokokų augimas įprastose maistinėse terpėse yra prastas, tačiau jis žymiai pagerėja, kai į maistinę terpę įpilama gliukozės (0,1%), kraujo, serumo ar ascitinio skysčio. Pneumokokai gerai auga atmosferoje, kurioje yra 5–10% anglies dioksido. Optimali temperatūra augimui yra 37 °, maksimali 42 °, mažiausia 25 °. Pneumokokai yra jautrūs maistinės terpės pH pokyčiams; optimalus pH yra 7,8, rūgštingumo riba - 6,5, o šarmingumas - 8,3. Ant maistinių agarų auga pneumokokai, suformuodami mažas 1 mm skersmens kolonijas, subtilias, permatomas, panašias į rasos lašus, kurios nesusilieja. Pneumokokų kolonijos specialiose maistinėse terpėse, pavyzdžiui, ant kraujo agaro (5%), yra mažos, drėgnos, skaidrios, gerai nubrėžtais kraštais, turi α-hemolizę, panašu, kad jas supa žalsvos spalvos plotas, panašus į pastebėta, kai žaliasis streptokokas (Streptococcus viridans).

Augdami ant spalvotų maistinių terpių, pneumokokai raugina angliavandenius, susidarant rūgščiai, bet nesusidarant dujoms. Inulino fermentacija yra svarbus skiriamasis pneumokokų bruožas (žaliasis streptokokas neturi galimybės skaidyti inulino). Pneumokokai rodo gebėjimą greitai autolizuotis veikiant tulžies druskoms. Tulžies ar tulžies druskos ištirpdo pneumokoką, kuris taip pat skiria jį nuo streptokoko.

Pneumokokai yra jautresni chinino ir kai kurių jo darinių baktericidiniam poveikiui nei daugelis kitų mikroorganizmų. Pavyzdžiui, optoquin (etilhidrokupreinas) naikina pneumokokus, kurių koncentracija yra 1: 500 000, o streptokokus - 1: 5000.

Laikydami įprastose maistinėse terpėse, pneumokokai greitai praranda savo virulentiškumą, tačiau mėnesius gali išsilaikyti šaltyje vakuume džiovintoje baltos pelės, mirusios nuo pneumokokinės septicemijos, blužnyje. Baltosios pelės ir triušiai jautriausiai reaguoja į pneumokokus, jūrų kiaulytės yra nejautrios, o katės, šunys, vištos ir balandžiai yra labai atsparūs. Pneumokokas nesukuria tikro toksino, tačiau susidaro hemolizinai, kurie yra aktyvūs prieš avių, jūrų kiaulių ir žmonių eritrocitus, taip pat hialuronidazę, lencacidiną ir nekrotizuojančią medžiagą. Pneumokokų virulentiškumas priklauso ne nuo nurodytų toksinių darinių, o nuo specifinės tirpios medžiagos, būdingos atitinkamo tipo pneumokokui.

Pneumokokuose yra keli antigenai. Mikrobinės ląstelės gilumoje yra nukleoproteino komponentas, susijęs su rūšies specifiškumu. Arčiau paviršiaus yra rūšiai būdingas polisacharidas (C antigenas) - somatinis antigenas, imunologiškai identiškas visuose pneumokokuose. Tipui būdingas baltymas (M-antigenas), panašus į hemolizinių streptokokų M-antigeną, taip pat yra netoli mikrobinės ląstelės paviršiaus. Paviršiuje esančią kapsulę sudaro visas polisacharidas arba jo dalis, būdingas kiekvienam pneumokoko tipui, ir jis yra glaudžiai susijęs su gyvo mikrobo virulentiškumu. Šis antigenas - polisacharidinis haptenas arba specifinė tirpi medžiaga (SSS) - būdingas tipui ir skirtas diferencijuoti imunologinius pneumokokų tipus.

Kiekvienas tipas turi individualią antigeninę struktūrą ir virulentiškumą. Pneumokokai, išsiskiriantys nuo plaučių uždegimo, pagal imunologines reakcijas skirstomi į I, I, III ir IV tipus. IV tipo pneumokokai yra imunologiškai nevienalyti. Šis tipas apima visus pneumokokus, kurie nepriklauso pirmiesiems trims tipams. Pneumokokų tipavimas buvo svarbus vienu metu dėl to, kad pneumonijos seroterapijos poveikis su specifiniu serumu buvo tiesiogiai proporcingas patogeno tipui.

Mikrobiologinę pneumokokų diagnostiką sudaro mikroskopinis tyrimas ir pneumokokų išskyrimas ant dirbtinių maistinių medžiagų. Pneumokoko tipą lemia: kapsulių išsipūtimo reakcija, mikroagliutinacijos ant stiklo reakcija (Seibino metodas) ir makroskopinės agliutinacijos reakcija. Jei dėl kokios nors priežasties negalima naudoti baltos pelės, skrepliai ar kita patologinė medžiaga yra įskiepijama į kraujo sultinį su gliukoze, kuris vėliau naudojamas kaip antigenas tose pačiose imunologinėse reakcijose.

Pneumokokai ant burnos ir viršutinių kvėpavimo takų gleivinės randami dažniau nei žmogaus aplinkoje. Pernešami pneumokokai oro lašeliniu būdu... IV tipo pneumokokai yra daug dažnesni nei I, II ir III tipai. Pastaruoju metu pneumokokų sėjos greitis labai sumažėjo, o stafilokokų - labai padaugėjo. Labai sumažėjus pneumokokų sėjos greičiui ir dėl to sumažėjus jų, kaip etiologinių veiksnių, vertei, E. coli, enterokokai, proteus ir kiti mikroorganizmai pradėjo išsiskirti didesniais kiekiais.

Įgytas imunitetas pneumokokui akivaizdžiai susijęs su kapsuliniu antigenu, kurio metu imunizacijos metu nustatoma aiški atsparumo koreliacija su atsaku antikūnų pavidalu šiam antigenui. Taip pat žiūrėkite Bakterijos.

Streptococcus gentis apima: Streptococcus pyogenes (hemolizinį) ir Streptococcus pneumoniae (pneumokoką). Pirmą kartą streptokokus atrado Billroth (1874), L. Pasteur (1879). Juos tyrė E. Rosenbachas (1884).

Streptococcus pyogenes (hemolizinis)

Morfologija... Streptokokai yra sferiniai kokai. Kiekvieno kokso skersmuo yra vidutiniškai 0,6-1 mikrono, tačiau jiems būdingas polimorfizmas: yra maži ir dideli kokai, griežtai rutuliški ir ovalūs. Streptokokai yra išsidėstę grandinėje, o tai yra jų dalijimosi vienoje plokštumoje rezultatas. Grandinių ilgis yra skirtingas. Ant tankios maistinės terpės grandinės paprastai būna trumpos, ant skystos - ilgos. Streptokokai yra nejudrūs, neturi sporų (žr. 4 pav.) Šviežiai izoliuotos kultūros kartais sudaro kapsulę. Itin plonose dalyse matoma mikrokapsulė, po kuria yra trijų sluoksnių ląstelių sienelė ir trijų sluoksnių citoplazminė membrana. Gramas teigiamas.

Auginimas... Streptokokai yra fakultatyviniai anaerobai. Jie auga 37 ° C temperatūroje ir 7,6–7,8 pH. Optimalios jų auginimo terpės yra terpės, kuriose yra kraujo arba kraujo serumo. Kietose maistinėse terpėse streptokokų kolonijos yra mažos, plokščios, drumstos, pilkšvos spalvos. Kraujo agare kai kurios streptokokų rūšys formuoja hemolizę. β-hemoliziniai streptokokai suformuoja aiškią hemolizės zoną, α-hemoliziniai streptokokai - nedidelę žalsvą zoną (hemoglobino perėjimo prie methemoglobino rezultatas). Yra streptokokų, kurie nesukelia hemolizės.

Streptokokai auga ant cukraus sultinio, susidarant parietalinei ir dugno smulkiagrūdėms nuosėdoms, o sultinys išlieka skaidrus.

Fermentinės savybės... Streptokokai turi sacharolitinių savybių. Jie skaido gliukozę, laktozę, sacharozę, manitolį (ne visada) ir maltozę, kad susidarytų rūgštis. Jų proteolitinės savybės yra silpnai išreikštos. Jie sutraukia pieną, neskystina želatinos.

Toksinų susidarymas... Streptokokai sudaro nemažai egzotoksinų: 1) streptolizinai - naikina eritrocitus (O-streptolizinas turi kardiotoksinį poveikį); 2) leukocidinas - naikina leukocitus (susidaro dėl labai virulentiškų padermių); 3) eritrogeninis (skarlatinos) toksinas - nustato skarlatinos klinikinį vaizdą - intoksikacija, kraujagyslių reakcijos, bėrimas ir kt. Eritrogeninio toksino sintezę lemia pranašai; 4) citotoksinai - turi galimybę sukelti glomerulonefritą.

Streptokokuose rasta įvairių antigenų. Ląstelės citoplazmoje yra specifinis antigeno nukleoproteininis pobūdis - tas pats visiems streptokokams. Baltymų tipo antigenai yra ant ląstelės sienos paviršiaus. Streptokokų ląstelių sienelėje buvo rastas polisacharidų grupės antigenas.

Pagal polisacharidų grupei būdingą antigeno frakcijos sudėtį visi streptokokai yra suskirstyti į grupes, žymimas didžiosiomis lotyniškomis raidėmis A, B, C, D ir kt. žymimi arabiškais skaitmenimis.

A grupei priklauso 70 tipų. Šiai grupei priklauso dauguma sukeliančių streptokokų įvairių ligųžmonėms. B grupėje daugiausia streptokokai, kurie yra oportunistiniai žmonėms. C grupė apima žmonėms ir gyvūnams patogeniškus streptokokus. D grupę sudaro streptokokai, kurie nėra patogeniški žmonėms, tačiau šiai grupei priklauso enterokokai, kurie yra žmonių ir gyvūnų žarnyno gyventojai. Patekę į kitus organus, jie sukelia uždegiminiai procesai: cholecistitas, pielitas ir kt. Taigi juos galima priskirti oportunistiniams mikrobams.

Izoliuotų kultūrų priklausomybė vienai iš serologinių grupių nustatoma naudojant nusodinimo reakciją su grupiniais serumais. Norint nustatyti serologinius tipus, naudojama agliutinacijos reakcija su tipui būdingais serumais.

Streptokokai yra gana atsparūs aplinkai. Esant 60 ° C temperatūrai, jie miršta po 30 minučių.

Džiovintame pūlyje ir skrepliuose jie išlieka mėnesius. Įprasta dezinfekavimo priemonių koncentracija juos sunaikina per 15-20 minučių. Enterokokai yra daug stabilesni, dezinfekuojantys tirpalai juos sunaikina tik po 50-60 minučių.

Gyvūnų jautrumas... Jautrus patogeniniams streptokokams galvijai, arkliai, šunys, paukščiai. Tarp laboratorinių gyvūnų jautrūs triušiai ir baltosios pelės. Tačiau žmonėms patogeniški streptokokai ne visada yra patogeniški eksperimentiniams gyvūnams.

Infekcijos šaltiniai... Žmonės (sergantys ir vežėjai), rečiau gyvūnai ar užkrėsti maisto produktai.

Perdavimo keliai... Galimos ore ir ore esančios dulkės, kartais maistas, kontaktas ir buitis.

Ligos gali atsirasti dėl egzogeninės infekcijos, taip pat endogeniškai - kai suaktyvinami sąlygiškai patogeniški streptokokai, kurie gyvena ant ryklės, nosiaryklės ir makšties gleivinės. Sumažėjęs organizmo atsparumas (atvėsimas, badas, pervargimas ir kt.) Gali sukelti autoinfekcijas.

Išankstinis sensibilizavimas turi didelę reikšmę streptokokinių infekcijų patogenezėje - dėl ankstesnės streptokokinės etiologijos ligos.

Kai streptokokai patenka į kraują, jie sukelia sunkų septinį procesą.

Žmonių ligos dažniau sukelia serologinės grupės A β-hemolizinius streptokokus. Jie gamina patogeninius fermentus: hialuronidazę, fibrinoliziną (streptokinazę), dezoksiribonukleazę ir kt. Be to, streptokokai turi kapsulę, M-baltymą, turinčius antifagocitinių savybių.

Streptokokai žmonėms sukelia įvairias ūmias ir lėtines infekcijas, susidaro pūlingos ir nepūlingos, skiriasi klinikine išvaizda ir patogeneze. Pūlingas - flegmonas, abscesai, žaizdų infekcijos, nepūlingos - ūminės infekcijos viršutiniai kvėpavimo takai, erysipelas, skarlatina, reumatas ir kt.

Streptokokai dažnai sukelia antrines gripo, tymų, kokliušo ir kitų ligų infekcijas ir dažnai apsunkina žaizdų infekcijas.

Imunitetas... Pagal savo pobūdį imunitetas yra antitoksinis ir antibakterinis. Postinfekcinis antimikrobinis imunitetas yra silpnas. Taip yra dėl silpno streptokokų imunogeniškumo ir daugybės serovarų, kurie nesuteikia kryžminio imuniteto. Be to, sergant streptokokinėmis ligomis, organizmas yra alergiškas, o tai paaiškina polinkį į recidyvą.

Prevencija... Sumažintas iki sanitarinių ir higienos priemonių, stiprinant bendrą kūno atsparumą. Specifinė profilaktika nebuvo sukurta.

Gydymas... Naudojami antibiotikai. Dažniau jie naudoja peniciliną, kuriam streptokokai neįgijo atsparumo, taip pat eritromiciną ir tetracikliną.

Streptokoko vertė reumatinės širdies ligos etiologijoje... Reumatinės širdies ligos patogenezė nebuvo pakankamai ištirta. Tačiau daugybė faktų byloja apie streptokoko vaidmenį vystantis šiai ligai:

1. Pacientams, sergantiems reumatine širdies liga, B- sėjama iš gerklės hemolizinis streptokokas.

2. Reumatas dažnai pasireiškia po gerklės skausmo, tonzilito, faringito, jautrinant organizmą.

3. Pacientų kraujo serume randama antistreptolizino, antistreptohialalonidazės - antikūnų prieš streptokoko fermentus, toksinus.

4. Netiesioginis streptokoko vaidmens patvirtinimas yra sėkmingas gydymas penicilinu.

Pastaruoju metu, atsiradus lėtinėms reumatinės širdies ligos formoms, priskiriamos streptokoko L formos.

Reumatinės širdies ligos paūmėjimų prevencija yra sumažinta iki streptokokinių ligų prevencijos (pavyzdžiui, pavasarį ir rudenį atliekamas profilaktinis penicilino vartojimo kursas). Gydymas sutrumpėja iki antibakterinių vaistų - penicilino - vartojimo.

Streptokoko vertė skarlatinos etiologijoje... GN Gabrichevsky (1902) pirmiausia pasiūlė, kad hemolizinis streptokokas yra skarlatinos sukėlėjas. Bet kadangi streptokokai, išskiriami kitomis ligomis, nesiskyrė nuo skarlatinos sukėlėjų, šiai nuomonei pritarė ne visi. Dabar nustatyta, kad skarlatiną sukelia A grupės streptokokai, kurie gamina eritrogeninį toksiną.

Sergantiems išsivysto imunitetas - patvarus, antitoksinis. Jo įtampa nustatoma surengus Dicko reakciją - eritrogeninio toksino injekciją į odą. Nesergančių aplink injekcijos vietą išsivysto hiperemija ir edema, kuri apibūdinama kaip teigiama reakcija (antitoksino nebuvimas kraujo serume). Pasveikusiems tokios reakcijos nėra, nes juose susidaręs antitoksinas neutralizuoja eritrogeninį toksiną.

Prevencija... Izoliacija, hospitalizavimas. Kontaktiniams, nusilpusiems vaikams suleidžiama gama globulino. Specifinė profilaktika nebuvo sukurta.

Gydymas... Naudojami penicilinas, tetraciklinas. Sunkiais atvejais skiriamas antitoksinis serumas.

Tyrimo tikslas: streptokoko identifikavimas ir jo serovaro nustatymas.

Medžiaga tyrimams

1. Gleivės iš ryklės (tonzilitas, skarlatina).

2. Nubraukimas nuo pažeistos odos vietos (erysipelas, streptoderma).

3. Pūliai (pūlinys).

4. Šlapimas (nefritas).

5. Kraujas (įtariamas sepsis; endokarditas).

Pagrindiniai tyrimo metodai

1. Bakteriologinis.

2. Mikroskopinis.

Tyrimų pažanga

Antroji tyrimų diena

Išimkite puodelius iš orkaitės ir patikrinkite. Jei yra įtartinų kolonijų, iš kai kurių jų daromi tepinėliai, dažomi pagal Gramą ir mikroskopuojami. Jei tepinėlyje randama streptokokų, dalis likusios kolonijos perkultūruojama į mėgintuvėlius ant serumo agaro, kad būtų galima išskirti gryną kultūrą, ir ant sultinio su krauju mėgintuvėliuose. Dienos pabaigoje 5-6 valandų kultūra iš sultinio ar agaro perkultūruojama ant Martino sultinio su 0,25% gliukozės, kad būtų nustatyta serologinė grupė Lensfieldo nusodinimo reakcijoje. Mėgintuvėliai ir buteliukai dedami į termostatą ir paliekami iki kitos dienos.

Trečioji tyrimų diena

Pasėliai pašalinami iš termostato, kultūros švarumas tikrinamas ant nuožulnaus agaro, daromi tepinėliai, dažomi pagal gramą ir mikroskopuojami. Esant grynai streptokoko kultūrai, inokuliacija atliekama ant Giss terpės (laktozės, gliukozės, maltozės, sacharozės ir manitolio), pieno, želatinos, 40% tulžies ir dedama į termostatą.

Naršykite Martin sultinį. Esant specifiniam augimui, serologinei grupei nustatyti atliekama Lensfieldo nusodinimo reakcija.

Lensfildo kritulių reakcijos nustatymas... Kasdieninė kultūra, išauginta ant Martino sultinio, supilama į keletą centrifugos mėgintuvėlių, centrifuguojama 10-15 minučių (3000 aps./min.).

Supernatantas supilamas į stiklainį su dezinfekuojančiu tirpalu, nuosėdos supilamos steriliu izotoniniu natrio chlorido tirpalu ir vėl centrifuguojamos. Į nuosėdas, surinktas iš visų centrifugos mėgintuvėlių, įpilama 0,4 ml 0,2% druskos rūgšties. Tada mėgintuvėlis dedamas į vandens vonią ir virinamas 15 minučių, kartais purtant. Užvirus, susidariusi suspensija vėl centrifuguojama. Tokiu atveju antigenas ekstrahuojamas ant supernatanto skysčio, kuris supilamas į švarų mėgintuvėlį ir neutralizuojamas 0,2% natrio hidroksido tirpalu iki pH 7,0–7,2. Kaip indikatorius pridedamas bromtimolio mėlynasis (0,01 ml 0,04% tirpalo). Su šia reakcija spalva pasikeičia iš šiaudų geltonos į mėlyną.

Tada į 5 nusodinimo mėgintuvėlius supilama 0,5 ml antistreptokokinės grupės serumų, kurie paruošiami imunizuojant triušius (žr. 19 skyrių). A serumas pridedamas prie 1 mėgintuvėlio, B serumas yra 2, C serumas yra 3, D serumas yra 4, o 5 izotoninis natrio chlorido tirpalas (kontrolinis). Po to naudodami Pasteur pipetę gautą ekstraktą (antigeną) atsargiai įkiškite į visus mėgintuvėlius palei sieną.

Jei mėgintuvėlyje su homologiniu serumu reakcija teigiama, ties ekstrakto riba su serumu susidaro plonas pieno baltumo žiedas (38 pav.).

Ketvirtoji tyrimų diena

Rezultatai registruojami (25 lentelė).

Šiuo metu nustatoma deoksiribonukleazė, taip pat antistreptohialalonidazė, antistreptolizinas-O.

Kontroliniai klausimai

1. Kokie yra pagrindiniai jūsų pažįstamų streptokokų nustatymo laboratoriniai tyrimai?

2. Kam reikalinga Lensfieldo kritulių reakcija?

3. Kodėl, rengiant šią reakciją, antigenas turėtų būti skaidrus? Apibūdinkite šios reakcijos inscenizavimo techniką.

Iš savo mokytojo gaukite antistreptokoko A, B, C, D serumą ir izotoninį natrio chlorido tirpalą. Įdėkite kritulių reakciją, parodykite rezultatus mokytojui ir eskizuokite.

Kultūros terpė

Agaras su krauju(žr. 7 skyrių).

Serumo agaras(žr. 7 skyrių).

Giss trečiadienis(sausa).

Mėsos peptono želatina (MPG)... Į 100 ml MPB įpilkite 10-15 g smulkiai supjaustytos želatinos. Želatina turėtų išbrinkti, kai lėtai kaitinama vandens vonelėje (40–50 ° C temperatūroje). Į išlydytą želatiną pridedama 10% natrio karbonato tirpalo (soda) ir pH sureguliuojamas iki 7,0. Tada tuoj pat filtruojama per sulankstytą filtrą. Filtravimas lėtas. Norėdami pagreitinti procesą, filtravimą galima atlikti karštame autoklave. Filtruota terpė supilama į 6-8 ml mėgintuvėlius ir sterilizuojama. Sterilizacija atliekama arba dalimis 100 ° C temperatūroje 3 dienas iš eilės, arba tuo pačiu metu 110 ° C temperatūroje 20 minučių autoklave. Terpė aušinama vertikaliai pastatytuose mėgintuvėliuose.

Pieno paruošimas... Šviežias pienas užvirinamas, padedamas parai į vėsią vietą, atlaisvinamas nuo grietinėlės, vėl užvirinamas. Palikite parai ir nuimkite viršutinį sluoksnį. Nugriebtas pienas filtruojamas per vatos sluoksnį, tada šarminamas 10% natrio karbonato tirpalu iki pH 7,2 ir supilamas į 5-6 ml mėgintuvėlius.

Bouillon Martin... Į mėsos vandenį įpilama vienodas kiekis peptono „Marten“ (maltos mėsos iš kiaulienos skrandžių, veikiamų druskos rūgštimi). Gautas mišinys virinamas 10 minučių, šarminamas 10% natrio hidroksido tirpalu iki pH 8,0, pridedama 0,5 natrio acetato, vėl užvirinama ir supilama į sterilius indus. Į Martino sultinį dedama 0,25% gliukozės.

Trečiadienis Kitt - Tarozzi(žr. 34 skyrių).

Streptococcus pneumoniae (pneumokokas)

Pneumokokus pirmą kartą aprašė R. Kochas (1871).

Morfologija... Pneumokokai yra diplokokai, kuriuose ląstelių šonai, nukreipti vienas į kitą, yra išlyginti, o priešingos pusės yra pailgos, todėl jie turi lancetišką formą, primenančią žvakės liepsną (žr. 4 pav.). Pneumokokų dydis yra 0,75–0,5 × 0,5–1 mikronai, jie išsidėstę poromis. Skystose maistinių medžiagų terpėse jie dažnai sudaro trumpas grandines ir tampa panašūs į streptokokus. Premokokai yra nejudrūs, neturi sporų, organizme jie sudaro kapsulę, supančią abu kokus. Kapsulėje yra karščiui atsparios medžiagos antifagino (kuris apsaugo pneumokoką nuo fagocitozės ir antikūnų). Augdami ant dirbtinių maistinių medžiagų, pneumokokai netenka kapsulės. Pneumokokai yra gramteigiami. Gramneigiamos bakterijos yra senose kultūrose.

Auginimas... Pneumokokai yra fakultatyviniai anaerobai. Jie auga 36-37 ° C temperatūroje ir 7,2-7,4 pH. Jie yra reiklūs terpėms, nes negali sintetinti daug amino rūgščių, todėl auga tik terpėse, pridedant natūralių baltymų (kraujo ar serumo). Ant serumo agaro jie sudaro mažas, subtilias, gana skaidrias kolonijas. Ant kraujo agaro auga drėgnos žalsvai pilkos kolonijos, apsuptos žalios zonos, kuri yra hemoglobino perėjimo prie methemoglobino rezultatas. Pneumokokai gerai auga sultinyje, papildytame 0,2% gliukozės, ir sultinyje su išrūgomis. Augimas skystose terpėse būdingas difuziniu drumstumu ir dulkėtomis nuosėdomis dugne.

Fermentinės savybės... Pneumokokai turi gana ryškų sacharolitinį aktyvumą. Jie suyra: laktozė, gliukozė, sacharozė, maltozė, inulinas, kad susidarytų rūgštis. Neraugina manitolio. Jų proteolitinės savybės yra silpnai išreikštos: jie sutraukia pieną, neskystina želatinos ir nesudaro indolo. Pneumokokai ištirpsta tulžyje. Svarbu inulino skaidymas ir ištirpimas tulžyje diagnostinis ženklas skiriantis Streptococcus pneumoniae nuo Streptococcus pyogenes.

Patogeniniai veiksniai... Pneumokokai sukelia hialuronidazę, fibrinoliziną ir kt.

Toksinų susidarymas... Pneumokokuose susidaro endotoksinas, hemolizinas, leukocidinas. Pneumokokų virulentiškumas taip pat susijęs su antifagino buvimu kapsulėje.

Antigeninė struktūra ir klasifikacija... Pneumokokų citoplazmoje yra baltymų antigenas, būdingas visai grupei, o kapsulėje - polisacharidinis antigenas. Pagal polisacharidų antigeną visi pneumokokai yra padalinti į 84 serovarus. Tarp patogeniškų žmonėms dažniausiai pasitaiko I, II, III serovaro.

Atsparus aplinkos veiksniams... Pneumokokai priklauso nestabilių mikroorganizmų grupei. 60 ° C temperatūra juos sunaikina per 3–5 minutes. Jie yra gana atsparūs žemai temperatūrai ir džiūvimui. Džiovintuose skrepliuose jie išlieka gyvybingi iki 2 mėnesių. Maistinėje terpėje jie išlieka ne ilgiau kaip 5-6 dienas. Todėl auginant būtina sėti kas 2-3 dienas. Įprasti dezinfekavimo priemonių tirpalai: 3% fenolio, gyvsidabrio chlorido, praskiedus 1: 1000, per kelias minutes juos sunaikina.

Pneumokokai yra ypač jautrūs optochinui, kuris juos pražudo skiedžiant 1: 100 000.

Gyvūnų jautrumas... Natūralus pneumokokų šeimininkas yra žmonės. Tačiau pneumokokai gali sukelti veršelių, ėriukų, paršelių, šunų ir beždžionių ligas. Iš eksperimentinių gyvūnų baltosios pelės yra labai jautrios pneumokokui.

Infekcijos šaltiniai... Sergantis žmogus ir bakterijų nešiotojas.

Perdavimo keliai... Ore lašeliai gali būti ore esančios dulkės.

Įėjimo vartai... Viršutinių kvėpavimo takų, akių ir ausies gleivinė.

Žmonių ligos... Pneumokokai gali sukelti skirtingos lokalizacijos uždegimines ligas. Specifiniai pneumokokams yra:

1) lobarinė pneumonija;

2) šliaužianti ragenos opa;

Dažniausia liga yra krupinė plaučių uždegimas, apimantis vieną, rečiau dvi ar tris plaučių skiltis. Liga yra ūmi, kartu aukštos temperatūros, kosulys. Paprastai tai baigiasi kritiškai.

Imunitetas... Po perkeltos ligos išlieka nestabilus imunitetas, nes plaučių uždegimui būdingi atkryčiai.

Prevencija... Sumažinta iki sanitarinių ir prevencinių priemonių. Specifinė profilaktika nebuvo sukurta.

Gydymas... Naudojami antibiotikai - penicilinas, tetraciklinas ir kt.

Kontroliniai klausimai

1. Pneumokokų morfologija. Auginimo ir fermentinės savybės.

2. Kokie veiksniai lemia pneumokokų patogeniškumą ir kas apsaugo pneumokokus nuo fagocitozės?

3. Kokie yra pagrindiniai pneumokokinės infekcijos vartai. Kokios ligos sukelia pneumokokus?

Mikrobiologinis tyrimas

Tyrimo tikslas: pneumokoko nustatymas.

Medžiaga tyrimams

1. Skrepliai (plaučių uždegimas).

2. Gleivės iš ryklės (gerklės skausmas).

3. Nuimamas nuo opos (šliaužianti ragenos opa).

4. Išmetimas iš ausies (vidurinės ausies uždegimas).

5. Pūliai (pūlinys).

6. Pleuros punkcija (pleuritas).

7. Kraujas (įtariamas sepsis).

1 (Geriau imti rytinį skreplį (esant specifinei pneumonijai skrepliai būna surūdiję).)

Pagrindiniai tyrimo metodai

1. Mikroskopinis.

2. Mikrobiologinis.

3. Biologinis.

Tyrimų pažanga

Biologinis mėginys... Šiek tiek (3–5 ml skreplių) emulguojama steriliame sultinyje, 0,5 ml šio mišinio į pilvaplėvės suleidžiama į baltą pelę. Po 6-8 valandų pelėms pasireiškia ligos požymiai. Šiuo metu pneumokoką jau galima rasti eksudate. pilvo ertmė... Eksudatas imamas steriliu švirkštu. Iš jo gaminami tepalai, dažomi pagal Gramą ir mikroskopiniai. Norint izoliuoti gryną kultūrą, eksudatas pasėjamas ant serumo agaro. Jei pelė miršta ar suserga, kraujas iš širdies užkrėstas agaro serumu, kad būtų galima išskirti gryną kultūrą. Pasėliai dedami į termostatą.

Pagreitintas metodas nustatyti pneumokoko tipą(mikroagliutinacijos reakcija). 4 lašai eksudato iš užkrėstos pelės pilvo ertmės užlašinami ant stiklinės stiklelio. I tipo agliutinuojantis serumas pridedamas prie pirmo lašo, II tipo serumas pridedamas prie antrojo, III tipo serumas - trečiojo, o izotoninis natrio chlorido tirpalas pridedamas prie ketvirtojo lašo (kontrolinis).

I ir II tipo serumai iš anksto praskiesti santykiu 1:10, o III tipo serumai - 1: 5. Visi lašai maišomi, džiovinami, fiksuojami ir dažomi praskiestu fuksinu. Jei rezultatas teigiamas, vienas iš lašų rodo mikrobų kaupimąsi (agliutinaciją).

Antroji tyrimų diena

Pasėliai pašalinami iš termostato, tiriami ir iš įtartinų kolonijų paimami tepinėliai. Jei tepinėliuose yra gramteigiamų lancetiškų diplokokų, gryna kultūra gaunama 2-3 kolonijose. Pasėliai dedami į termostatą. Iš sultinio daromi tepalai, dažomi pagal „Gram“ ir mikroskopuojami.

Trečioji tyrimų diena

Pasėliai pašalinami iš termostato. Tikrinamas kultūros grynumas - daromi tepinėliai, dažomi pagal Gramą ir mikroskopiniai. Jei izoliuotoje kultūroje yra gramteigiamų lancetiškų diplokokų, izoliuota kultūra identifikuojama sėjant:

1) sėjimas ant Giss terpės (laktozės, gliukozės, sacharozės, maltozės) atliekamas įprastu būdu - įpurškiant į terpę;

2) terpėje su inulinu;

3) terpėje su optochinu;

4) testas su tulžimi.

Inulino testas... Tiriama kultūra pasėjama į maistinę terpę, kurioje yra inulino ir lakmuso tinktūros, ir dedama į termostatą. Po 18–24 valandų pasėliai pašalinami iš termostato. Esant pneumokokams, terpė parausta (streptokokai nepakeičia terpės konsistencijos ir spalvos).

Jautrumo optochinui nustatymas... Pasirinkta kultūra skiepijama 10% kraujo agaru, kuriame yra optoquin 1: 50 000. Pneumokokai, skirtingai nei streptokokai, neauga terpėse, kuriose yra optoquin.

Tulžies tyrimas... 1 ml tiriamos sultinio kultūros supilama į agliutinacijos mėgintuvėlius. Į vieną iš jų pridedamas triušio tulžies lašas, antrasis mėgintuvėlis naudojamas kaip kontrolė. Abu vamzdeliai dedami į termostatą. Po 18–24 valandų įvyksta pneumokokinė lizė, kuri išreiškiama drumsto sultinio skaidrinimu. Kontrolėje suspensija lieka drumsta.

Tulžies mėginį galima įdėti į kietą maistinę terpę. Norėdami tai padaryti, ant pneumokokų kolonijos, užaugintos plokštelėse su agaru ir serumu, uždedamas sausos tulžies grūdelis - kolonija ištirpsta - dingsta.

Ketvirtoji tyrimų diena

Rezultatai registruojami (26 lentelė).

Pastaba. k - angliavandenių skilimas susidarant rūgščiai.

Šiuo metu plačiai naudojama serologiniai metodai tyrimai (RSK ir RIGA) streptokokų antikūnams nustatyti. Izoliuotos kultūros grupės ir serovaro nustatymas atliekamas naudojant fluorescuojančius antikūnus.

Pneumokoko virulentiškumo nustatymas... Kasdieninė pneumokoko sultinio kultūra praskiedžiama 1% peptono vandens nuo 10 -2 iki 10-8, po 0,5 ml kiekvieno praskiedimo įšvirkščiamas į dvi baltąsias peles. Kultūra, sukėlusi pelių mirtį skiedžiant 10–7, vertinama kaip virulentiška, 10–4–10–6 praskiedus laikoma vidutinio virulentiškumo. Kultūra, kuri nežudo pelių, yra avirulentiška.

Kontroliniai klausimai

1. Kokius grynos pneumokokų kultūros išskyrimo metodus žinote?

2. Kuris gyvūnas yra jautriausias pneumokokui?

3. Kokios reakcijos ir kokiu tikslu yra užkrėstos pelės eksudatas?

4. Nuo kokių piogeninių kokų atstovų reikėtų skirti pneumokoką ir kokiu tyrimu?

5. Kaip nustatyti pneumokokų virulentiškumą?

Užduotis

Sudarykite skreplių tyrimo diagramą, nurodydami jos etapus pagal dieną.

Kultūros terpė

Serumo agaras(žr. 7 skyrių).

Išrūgų sultinys(žr. 7 skyrių).

Agaras su krauju(žr. 7 skyrių).

Giss trečiadienis(sausa).

Inulino mėginio terpė... Į 200 ml distiliuoto vandens įpilkite 10 ml inaktyvuoto galvijų serumo, 18 ml lakmuso tinktūros ir 3 g inulino. Sterilizuojama tekančiais garais 100 ° C temperatūroje 3 dienas iš eilės. Tulžies sultinys (žr. 7 skyrių).