Frengi analizi, en yaygın laboratuvar testlerinden biridir. Frengi testleri, önleyici muayenelerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Mikroskopi, sifilizin etken maddesini ortaya çıkarır -. Serolojik reaksiyonların yardımıyla sifiliz teşhisi doğrulanır, gizli sifiliz teşhisi konur, tedavinin etkinliği izlenir ve hastaların tedavisi belirlenir.

Frengi teşhisi, klinik veriler, malzeme numunelerinde frengiye neden olan ajanların tespiti ve teşhisin serolojik araştırma yöntemleri ile doğrulanması temelinde konur. Frengi belirtileri çok sayıda ve çeşitlidir, bu nedenle hastalık farklı uzmanlık doktorları tarafından tespit edilir. Primer sifilizin ayırıcı tanısı bir dizi hastalıkla gerçekleştirilir.

İncir. 1. Fotoğrafta, frenginin birincil tezahürü zor bir şanstır.

Treponema Pallidum Antikorları ve Serolojik Tanı

Frengi ile enfekte olduğunda, hastanın vücudunda antikorlar oluşur. Serolojik teşhis, doktorun, sifilizli bir hastanın vücudundaki antikor oluşumunun dinamiklerini hastalığın ilk aşamalarında, tedavi süresince ve sona ermesinden sonra, hastalığın nüksetmesi sorununu çözmesine yardımcı olur. kitle tıbbi koşullar altında sifiliz teşhisi için hasta veya yeniden enfeksiyon (yeniden enfeksiyon).

Treponema pallidum IgM'ye karşı antikorlar

IgM antikorları enfeksiyondan sonra üretilir. Enfeksiyondan sonraki ikinci haftadan itibaren serolojik reaksiyonlar kullanılarak tespit edilmeye başlarlar. 6 - 9 haftalık hastalıkta sayıları maksimum olur. Hasta tedavi edilmemişse, antikorlar altı ay sonra kaybolur. IgM antikorları 1-2 ay sonra kaybolur. sonra, 3 - 6 ay sonra. - geç sifiliz tedavisinden sonra. Büyümeleri kaydedilirse, bu yeniden enfeksiyona hizmet eder veya bundan bahseder. IgM molekülleri büyüktür ve plasentadan fetüse geçmez.

Treponema pallidum IgG'ye karşı antikorlar

Antikorlar IgG immünoglobulinleri, enfeksiyon anından itibaren ilk ayın sonunda (4. haftada) ortaya çıkar. Titreleri IgM'den daha yüksektir. IgG, tedaviden sonra uzun süre devam eder.

Spesifik olmayan antikorlar

Birçok serolojik reaksiyon vardır. Bu, soluk treponemaların antijenik çoğulluğundan kaynaklanmaktadır. Hasta bir kişinin kan serumunda Farklı aşamalar sifiliz, spesifik olanlara ek olarak, belirli spesifik olmayan antikorlar oluşur - aglutininler, tamamlayıcı bağlayıcı, immobilisinler, bağışıklık floresansına neden olan antikorlar, çökeltiler, vb. reaksiyonlar (DAC).

Frengi için yanlış pozitif testler

Ayırt edici özellik treponemal olmayan bir test, yanlış pozitif reaksiyonların alınmasıdır. Kardiyolipin antijenine karşı insan kanında üretilen antikorlar-reajinler, sadece sifilizde değil, diğer hastalıklarda da kaydedilir: kollajenozlar, hepatit, böbrek hastalıkları, tirotoksikoz, kanser, bulaşıcı hastalıklar (cüzzam, tüberküloz, bruselloz, sıtma, , kızıl), hamilelik ve adet sırasında, yağlı yiyecekler ve alkol yerken. Yaşla birlikte yanlış pozitif reaksiyonların sayısının arttığı belirtilmektedir.

İncir. 2. Fotoğraf, kadınlarda birincil sifiliz gösterir.

Serolojik testler kullanılarak sifilizin laboratuvar teşhisi

Frengi için serolojik testler treponemal ve treponemal olmayan olarak sınıflandırılır.

1. Treponemal olmayan testler

Bu test grubunda antijen olarak kardiyolipin antijeni kullanılır. Frengiye neden olan ajanların lipid antijenleri en çoktur. Hücrenin kuru kütlesinin 1/3'ünü oluştururlar. Treponemal olmayan testler, kardiyolipin antijenine karşı üretilen reaktif antikorları tespit eder. Bu grup, tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonunu (RSCcard), mikro çökeltme reaksiyonunu (RMP), plazma reaktiflerinin hızlı belirlenmesini (RPR), vb. içerir. Treponemal olmayan testler kullanılarak, sifiliz için birincil tarama (nüfus gruplarının incelenmesi) yapılır, ve kantitatif bir versiyonda sonuç alma olasılığı, tedavinin etkinliğini izlemek için bu testleri kullanmanıza izin verir. Treponemal olmayan testlerden elde edilen pozitif sonuçlar treponemal testlerle doğrulanmalıdır. Treponemal olmayan testlerin ayırt edici bir özelliği, yanlış pozitif reaksiyonların alınmasıdır.

2. Treponemal testler

Treponemal testler, soluk treponema kültüründen izole edilen treponemal kökenli antijenleri kullanır. Onların yardımıyla treponemal olmayan testlerin olumlu sonuçları doğrulanır. Grup şunları içerir: RSCtrep - kompleman bağlama reaksiyonu, RIF - immünofloresan reaksiyonu ve modifikasyonu, RIT, RIBT - soluk treponemaların immobilizasyonunun reaksiyonu, RPHA - pasif hemaglütinasyon reaksiyonu, ELISA - enzime bağlı immünosorbent tahlili.

3. Rekombinant antijenler kullanarak sifiliz testleri

Bu test grubu için antijenler genetik olarak tasarlanmıştır ve reaksiyonlarda - RPHA ve ELISA, immünoblotlama (IB) analizlerinde ve immünokromatografik analizlerde kullanılır.

İncir. 3. Frengi teşhisi için bir dizi serolojik test kullanılır.

Treponemal olmayan testler kullanılarak sifiliz teşhisi

Frengiyi tespit etmek için treponemal olmayan testler veya bir dizi serolojik test (CSR) kullanılır. Serolojik tanı, enfeksiyon anından itibaren 5. haftadan veya görünümden 2-3 hafta sonra uygulanır. Taze primer olan hemen hemen tüm hastalarda antikorlar tespit edilir. Serolojik reaksiyonlar, üçüncül latent sifilizli hastaların %70-80'inde, vakaların %50-60'ında pozitiftir.

Treponemal olmayan testleri kullanan serolojik testler yanlış pozitif sonuçlar verebilir.

İncir. 4. Frengi testi için kan örneği.

Kompleman bağlama reaksiyonu (CSC kartı, CA'lı CSC, Wasserman reaksiyonu)

A. Wasserman tarafından 100 yıldan fazla bir süre önce icat edilen Wasserman reaksiyonu (RW, RV), günümüzde birçok değişikliğe uğradı, ancak geleneğe bir övgü olarak adını günümüze kadar korudu. Bir kardiyolipin antijeni kullanan tamamlayıcı bağlama reaksiyonu, yalnızca antikorların tespiti için değil, aynı zamanda kantitatif bir versiyonda da gerçekleştirilir - farklı serum seyreltmeleriyle, bu da tedavinin etkinliğini izlemek için kullanılmasını mümkün kılar. Düşük duyarlılık ve özgüllük, yanlış pozitif sonuçlar elde edilmesi bu tip çalışmanın olumsuz yönleridir.

Wasserman reaksiyonunun özü şu şekildedir: Wasserman reaksiyonunun evrelenmesinde kullanılan antijenler, insan kanında sifilizin nedensel ajanlarına karşı antikorların bulunması durumunda, onlara bir iltifat yoluyla bağlanır ve çöker. Reaksiyonun yoğunluğu (+) işareti ile gösterilir. Reaksiyon negatif (-) olabilir - tortu yok, şüpheli (az tortu veya +), hafif pozitif (++), pozitif (++++) ve keskin pozitif (++++).

Daha hassas, değiştirilmiş Wasserman reaksiyonudur - Kolmer reaksiyonu. Yardımı ile, Wasserman reaksiyonunun negatif sonuç verdiği serumda antikorlar tespit edilir.

Keskin pozitif reaksiyonlar durumunda, serumun 1:10 ila 1: 320 arasındaki seyreltmelerde kullanıldığı, tedavinin etkinliğini izlemek için bu tür bir çalışmanın kullanılmasını mümkün kılan kantitatif bir reaktif tayini yapılır. Örneğin, antikor titresinde bir azalma ve müteakip seronegatiflikleri (negatif sonuçlar elde etmek), hastalığın başarılı bir şekilde iyileştirildiğini gösterir.

İncir. 5. Frengi için kan testi - Wasserman'ın tepkisi.

Yağış mikro reaksiyonu (MPR)

Yağışların mikro reaksiyonu, nüfusun belirli gruplarının toplu muayeneleri, sifiliz teşhisi ve tedavinin etkinliğinin izlenmesi için kullanılır. Bu tür araştırmaların yapılabilmesi için gerekli küçük miktar araştırılan malzeme Çökeltmenin mikro reaksiyonu, immünolojik antijen-antikor reaksiyonuna dayanır. Öznenin kan serumunda antikorların bulunması durumunda, antijen-antikor kompleksi pul oluşumu ile çöker. Reaksiyon, özel bir cam plakanın kuyularında gerçekleştirilir. Wasserman reaksiyonu olarak çökeltinin yoğunluğu ve (+) içindeki pulların boyutu ile tahmin edilir. Hamile kadınları, donörleri muayene ederken ve tedavinin etkinliğini izlemek için kullanılmaz. VDRL ve RPR, mikro reaksiyon türleridir.

İncir. 6. Bardak üzerine bir damlada çökelme reaksiyonu tipi.

İncir. 7. Frengi için kan testi - mikro çökeltme reaksiyonu.

İncir. 8. Plazma reaktiflerinin hızlı belirlenmesi için kit (RPR sifiliz testi).

Spesifik olmayan serolojik reaksiyonlar sırasında elde edilen tüm pozitif testler, spesifik reaksiyonlar - treponemal testler ile onay gerektirir.

Treponemal testler kullanılarak sifiliz teşhisi

Treponemal testler yapılırken treponemal kökenli antijenler kullanılır. Olumsuz yönleri, tedavinin etkinliğini kontrol etmek, spiroketoz ve zührevi olmayan treponematozlarda olumlu sonuçlar elde etmek ve yanlış pozitif sonuçlar elde etmek için bunları kullanmanın imkansızlığıdır. onkolojik hastalıklar, cüzzam, bazı endokrin patoloji. RPHA, ELISA ve RIF gibi testler, frengi iyileştikten sonra yıllarca ve bazı durumlarda ömür boyu pozitif kalır.

RIBT ve RIF, frengiyi teşhis etmek için kullanılan tüm serolojik testlerin daha spesifik olanlarıdır. Yanlış pozitif reaksiyonları ayırt etmeyi, negatif reaksiyonlarla ortaya çıkan geç sifiliz formlarını tanımlamayı mümkün kılarlar. RIBT'nin yardımıyla, çocuğun enfeksiyon sorununu çözmek gerektiğinde hamile kadınlarda yanlış pozitif reaksiyonlar tanınır.

Soluk treponemaların immobilizasyon reaksiyonu (RIBT, RIT)

Reaksiyonun özü, hastanın kan serumundaki antikorların soluk treponemayı hareketsiz hale getirmesidir. Patojenlerin %20'ye kadar immobilizasyonu, zayıf pozitif - %21 - %50, pozitif - %50 - %100'e kadar immobilizasyon durumunda negatif reaksiyon kabul edilir. RIBT bazen yanlış pozitif sonuçlar verir. Test karmaşık ve zaman alıcıdır, ancak yürütülürken yeri doldurulamaz. ayırıcı tanı hastalığın gizli formları ve hamile kadınlar da dahil olmak üzere serolojik reaksiyonların yanlış pozitif sonuçları. RIBT, sekonder, erken ve geç sifilizde, vakaların %94 - 100'ünde - diğer sifiliz formlarında %100 pozitif sonuç verir.

İmmünofloresan reaksiyonu (RIF)

Reaksiyonun özü, florokromlarla etiketlenmiş antikorlarla birleştirilen soluk treponemlerin (antijenler), ışıldayan bir mikroskopta sarı-yeşil bir parıltı yaymasıdır. Sonuç (+) işareti ile değerlendirilir. RIF yardımı ile A sınıfı immünoglobulinler tespit edilir.İmmünfloresan reaksiyonu Wasserman reaksiyonundan daha erken pozitif hale gelir. Sekonder ve latent sifilizde her zaman pozitiftir, vakaların %95 - 100'ünde tersiyer ve konjenital sifilizde pozitiftir. Bu tür bir araştırmayı yürütme tekniği RIBT'ninkinden daha basittir, ancak bu reaksiyon özgüllük açısından RIBT'den daha düşük olduğu için RIF'yi RIBT ile değiştirmek imkansızdır. RIF-10 (RIF modifikasyonu) daha duyarlıdır, RIF-200 ve RIF-abs daha spesifiktir.

İncir. 9. Frengi için kan testi - immünofloresan (RIF) reaksiyonu.

Treponema pallidum bağışıklık tepkisi (PALRT)

Reaksiyonun özü, kompleman varlığında hastanın serumu tarafından duyarlı hale getirilen soluk treponemaların eritrositlerin yüzeyine yapışmasıdır. Ortaya çıkan kompleksler, cetrofugasyon sırasında çökelir. Bu testin duyarlılığı ve özgüllüğü RIF ve RIBT'ye yakındır.

Frengi için immünoassay (ELISA)

ELISA yardımı ile M ve G sınıfı immünoglobulinler belirlenir, IgM - ELISA tarama ve doğrulama testi olarak kullanılabilir. ELISA'nın duyarlılığı ve özgüllüğü RIF'ninkilere benzer. Frengi ile ELISA, enfeksiyonun üçüncü ayından itibaren olumlu sonuçlar verir ve oldukça uzun bir süre (bazen tüm yaşam boyunca) pozitif kalır.

İncir. 10. İmmünoassay analizörü.

Pasif (dolaylı) hemaglütinasyon reaksiyonu (RPHA)

RPHA, treponema pallidum antijenlerinin adsorbe edildiği eritrositlerin hastanın serumu varlığında birbirine yapışma (hemaglütinasyon) yeteneğine dayanır. RPGA, gizli de dahil olmak üzere tüm sifiliz formlarını teşhis etmek için kullanılır. başvururken Yüksek kalite antijen, bu tip serolojik reaksiyon, özgüllük ve duyarlılık açısından diğer tüm testleri aşmaktadır.

İncir. 11. RPHA, her türlü frengiyi teşhis etmek için kullanılır.

İncir. 12. Frengi analizi - pasif (dolaylı) hemaglütinasyonun (şema) reaksiyonu.

İncir. 13. Tüpün tabanının tamamını kaplayan ters çevrilmiş bir şemsiyenin görünümü, pozitif bir reaksiyonu gösterir. Eritrositlerin test tüpünün tabanının ortasındaki bir sütuna ("düğme") yerleşmesi durumunda, negatif bir reaksiyondan bahsederler.

İncir. 14. Laboratuvar koşullarında RPGA testi.

Mikrobiyolojik teşhis

Serolojik teşhis ile birlikte, soluk treponemaları (mikrobiyolojik teşhis) tespit etme yöntemi, özellikle kanda antikor bulunmadığında seronegatif sifiliz döneminde önemli bir rol oynar, ancak zaten taze primer sifilizin ilk belirtileri (sert) vardır. şans).

Araştırma için biyolojik materyal, katı ülserlerin (şankre) yüzeyinden akıntı, püstüler sifilidlerin içeriği, ağlayan ve aşındırıcı papüller, enfekte olmuş noktacıklardır. Lenf düğümleri, beyin omurilik sıvısı ve amniyotik sıvı, PCR için - kan.

Frengiye neden olan ajanları saptamak için en iyi teknik, biyolojik materyalin bir mikroskobun karanlık alanında incelenmesidir. Bu teknik, canlı bir durumda soluk treponema görmenizi, yapısal özelliklerini ve hareketlerini incelemenizi, patojenik patojenleri saprofitlerden ayırt etmenizi sağlar.

İncir. 15. Frengi analizi - karanlık alan mikroskobu.

İncir. 16. Kuru lekeleri incelerken, Romanovsky-Giemsa'ya göre boyama kullanılır. Soluk treponemalar pembeye döner, diğer tüm spiroket türleri mora döner.

Karanlık alan mikroskobu ile soluk treponemanın tespiti, sifilizin kesin teşhisi için mutlak bir kriterdir.

İncir. 17. Bakterileri tespit etmek için bir immünofloresan reaksiyonu (RIF) kullanılır - bir treponemal test. Spesifik bir antijen-antikor kompleksi, florokrom ile etiketlenmiş spesifik bir serum ile bir lüminesan mikroskop ışığında birleştirildiğinde, yeşilimsi bir bakteri parıltısı verir.

İncir. 18. Levaditi yöntemine (gümüş emdirme) göre hazırlanan smearlerde frengiye neden olan ajanlar açıkça görülebilir. Enfekte doku hücrelerinin sarı renklenmesinin arka planına karşı koyu renkli soluk treponemalar.

İncir. 20. Fotoğrafta soluk treponema kolonisi görülmektedir. Bakteri kültürü elde etmek zordur. Yapay besin ortamlarında pratik olarak büyümezler. At ve tavşan serumu içeren besiyerlerinde 3. - 9. günlerde koloniler ortaya çıkar.

frengi için PCR

Polimeraz zincir reaksiyonunu gerçekleştirme yöntemi günümüzde etkili ve umut vericidir. Frengi için PCR, birkaç saat içinde sonuç almanızı sağlar ve tanı için toplanan materyalde en az birkaç patojen bulunabilir.

İncir. 21. Frengi için PCR, DNA'nın veya soluk treponema parçalarının tespit edilmesini sağlar.

Bu araştırma yönteminin duyarlılığı biyolojik materyalde soluk treponemaların varlığına bağlıdır ve %98.6'ya ulaşır. Bu testin özgüllüğü büyük ölçüde şunlara bağlıdır: doğru seçim teşhis sırasında amplifikasyon hedefi ve %100'e ulaşır.

Aynı zamanda yeterince çalışılmamış olması nedeniyle karşılaştırmalı özellikler sifiliz ve PCR teşhisi için doğrudan yöntemlerin duyarlılığı ve özgüllüğü, Rusya Federasyonu'nda hastalığın teşhisi için bu inceleme yöntemine henüz izin verilmemektedir.

Sifiliz için PCR'nin yalnızca bazı durumlarda, konjenital sifiliz, nörosifiliz teşhisi için ek bir yöntem olarak, HIV hastalarında serolojik araştırma yöntemlerini kullanarak sifiliz teşhisinin zor olduğu durumlarda yapılmasına izin verilir.

İncir. 22. Treponema palet DNA'sının PCR kullanılarak saptanması, ya canlı bakterilerin varlığını ya da ölü kalıntılarını gösterir, ancak ek kopyalar oluşturabilen kromozomal DNA'nın ayrı bölümlerinin ek kopyalarını içerir.

serolojik yöntem dayalı bir tepkiler dizisidir. antijen-antikor etkileşimi (Ag-Ab) ve serum ve diğer vücut sıvılarında bulaşıcı hastalıkların patojenlerinin antijenlerine veya aslında mikrobiyal antijenlere karşı antikorları tespit etmeyi amaçlar. Serolojik yöntem, yüksek duyarlılık ve özgüllük ile karakterizedir. Bu yöntemin reaksiyonlarının çoğunun gerçekleştirilmesi ve kaydedilmesi kolaydır, çok çeşitli laboratuvarlarda mevcuttur, kural olarak güvenli, ekonomik ve standardizasyona uygundurlar. İLE Dezavantajları serolojik yöntem atfedilebilir: 1) hastalığın etiyolojisi patojenin izolasyonu ile değil, organizmanın patojene tepkisi (bağışıklık) ile yargılandığında sonucun dolaylı doğası; 2) hastanın vücuduna parenteral müdahale ihtiyacı; 3) çoğu durumda, hümoral immün yanıtın doğal dinamikleri ile açıklanan geç tanı; 4) Ab için anamnestik Ab'yi (önceki bir hastalık veya aşının bir sonucu olarak) mevcut enfeksiyona alma yeteneği. 3. ve 4. mikrobiyal antijenleri belirlerken hiçbir dezavantaj yoktur, ancak farklı mikropların antijenlerinin dolaşımının özelliklerini dikkate almak ve bu özellikleri araştırma için materyal alma olasılığı ile ilişkilendirmek gerekir.

Serolojik yöntemin aşamaları:

1) almak araştırma malzemeleri... Çoğu durumda, malzeme kan serumu... Kan pıhtısı oluşumundan sonra elde edilir, kanın standart yönteme göre kesinlikle aseptik koşullar altında toplanması gerekir,

2) belirli bir vaka için serolojik reaksiyon seçimi, çalışmanın amacına, iddia edilen hastalığa, hastalığın evresine, çalışma için materyale, reaksiyonun duyarlılığına ve belirli bir laboratuvarın yeteneklerine bağlıdır. Ab'nin yanı sıra Ag'yi tespit etmek için aglütinasyon reaksiyonları ( RA), pasif hemaglütinasyon ( RPGA)), immünofloresan (KAYALIK), hemaglütinasyonun inhibisyonu ( RTGA), yağış, flokülasyon, tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu (RSC), vb.

3) serolojik bir reaksiyonun evrelenmesi,

4) Serolojik enfeksiyon belirteçlerinin varlığını belirlemek için bir serolojik reaksiyonun kaydı.

Çeşitli serolojik reaksiyonlar birkaç ile karakterize edilir. Genel özellikleri:

1) herhangi bir serolojik reaksiyon, Ab ve Ar arasındaki etkileşim reaksiyonları olduğundan, her durumda, çalışılan substratta Ab'nin varlığını belirlemek için, bir dizi bilinen standart korpüsküler veya çözünür Ar gereklidir. teşhis... Buna karşılık, Ar'ın varlığını belirlemek için bir dizi bağışıklık tanı serumu,

2) Ar ve Ab'nin etkileşimi, yalnızca genellikle izotonik sodyum klorür çözeltisi veya tampon karışımları olarak kullanılan bir elektrolit varlığında gerçekleştirilir, sistemin pH'ı yaklaşık 7 olmalıdır,

3) Ag-Ab kompleksinin oluşumu için özel sıcaklık koşulları altında (+4 °C ila 37 °C) bir kuluçka süresi gereklidir. Spesifik bir bağışıklık kompleksinin oluşumu hızla gerçekleşir; çıplak gözle görülebilen bir fenomen (aglütinasyon, lizis, vb.) - birkaç saat hatta günler sonra yavaş yavaş,

4) serolojik reaksiyonun her iki bileşeni (antijen ve antikorlar) eşdeğer bir oranda mevcut olmalıdır. Bileşenlerden herhangi birinin fazlalığı, Ag-Ab kompleksinin oluşumunu engeller ve yanlış negatif sonuçlara katkıda bulunur.

Serolojik reaksiyonlar bazen bir büyüteç kullanılarak görsel olarak kaydedilir. Serolojik reaksiyonu dikkate almanın özü, Ag-Ab kompleksinin oluşumu ile Ag ve Ab'nin bağlanması fenomenini belirlemeye indirgenir. Görsel olarak, Ag-Ab kompleksinin oluşumuna iki ana fenomen eşlik eder - aglütinasyon ve çökelme. Aralarındaki farklar, antijenlerin ve onlara özgü antikorların özelliklerine göre belirlenir. Aynı zamanda, mikrobiyal antijenler arasında, çökelmeyenlerin sentezini indükleyenler de vardır, bu durumda Ag-Ab kompleksinin oluşumuna aglütinasyon fenomeni veya çökelme fenomeni eşlik etmez ve Ag-Ab kompleksinin oluşum gerçeğinin tanımlanması, reaksiyonun teşhis bileşeninin özel işaretlerle işaretlenmesini veya teşhis antijeninin başka bir kümelenme durumuna aktarılmasını gerektirir.

Reaksiyonu değerlendirirken 3 ana kriter kullanılır: 1) reaksiyonun varlığı ve yoğunluğu (artılarda vb.); 2) tanı titresi, 3) hastalığın seyri sırasında Ab titresinde 4 kat veya daha fazla artış. Bir reaksiyonun varlığı, görsel fenomenler veya bir immünokimyasal işaretleyicinin bağlanması ile belirlenir. Serolojik reaksiyonun yoğunluğunu değerlendirmek için 4 "+" ilkesi kullanılır (Tablo 7).

Tablo 7.

Aglütinasyon ve çökelme reaksiyonları için 4 "+" ile serolojik reaksiyonları değerlendirme sistemi

Bir serolojik reaksiyonun sonuçlarının nicel sunumu için bir antikor veya antijen titresi kavramı kullanılır. Ab tipini (veya Ar titresini) belirlemek için, bir dizi kan serumu veya başka materyal (titrat) dilüsyonu hazırlayarak serolojik bir reaksiyon oluşturmak gerekir. Kan serumu seyreltmelerini hazırlarken, bir elektrolit çözeltisi kullanılır (çoğunlukla izotonik sodyum klorür çözeltisi). Seyreltme (titrasyon) adımı, elektrolit çözeltisinin hacminin ve kan serumunun hacminin oranıyla belirlenir. Örneğin 1. test tüpünde 2 kez art arda seyreltmelerle eşit hacimlerde elektrolit solüsyonu ve kan serumu karıştırılır, 5 defalık bir adımda elektrolit solüsyonunun 4 hacim parçasına 1 hacim serum eklenir. , 10 kez - 9'a kadar bir adımla elektrolit çözeltisi hacimlerine 1 hacim kan serumu eklenir (Tablo 8).

Serolojik teşhis yöntemi, 2 araştırma alanının kullanılmasını sağlar: serodiagnostik (deneklerin serumunda spesifik antikorların tespiti) ve sero-tanımlama (tipini ve tipini belirlemek için izole edilmiş bir patojenin antijenik özelliklerinin belirlenmesi) .

Serodiagnostikte, aglütinasyon, çökelme, lizis, CSC reaksiyonları, etiketli antijenler veya antikorlar kullanılarak reaksiyonlar kullanılır. Bu reaksiyonların bileşenleri şunlardır: incelenen hastaların kan serumu ve standart antijenik preparatlar. Araştırmanın amacı, çalışılan serumdaki bulaşıcı hastalıkların patojenlerine karşı antikor titrelerini belirlemektir.

Spesifik antikorların yüksek titrelerinin saptanması, özellikle "diagnostik" titrelerin düzeyine ulaştıklarında, olası tanıyı doğrular. Hastalığın en başında (3-4. gün) alınan serumlar ile hastalığın 7-10. gününde alınan serumlar aynı anda titre edildiğinde, eşleştirilmiş serumların çalışmasına büyük önem verilir. Antikor titrelerinde 4 katlık bir artış tanısal değerdedir.

Sero-tanımlamada en sık olarak cam üzerindeki aglütinasyon reaksiyonu kullanılır. Reaksiyon bileşenleri: büyümüş saf kültür hastalığın etken maddesi (antijen) ve standart tanısal immün tavşan serumu (antikorlar).

Serolojik yöntemin saygınlığı- basitlik, kullanılabilirlik, yüksek hassasiyet, özgüllük, hızlılık.

Dezavantajları: pahalı standart ilaç ve ekipman ihtiyacı.

alerjik yöntem

Bu method büyük bir etkiye sahip belirli bir enfeksiyöz ajana karşı vücut duyarlılığının tanımlanmasını sağlar. tanı değeri... Bazı bulaşıcı hastalıkların seyrine gecikmiş tipte aşırı duyarlılık oluşumunun eşlik ettiği bilinmektedir. Bu bağlamda, bu tür hastalara küçük dozlarda alerjenin intradermal uygulaması, alerjenle tekrar tekrar karşılaşmanın neden olduğu vücuttan karşılık gelen bir reaksiyona neden olur. Reaksiyon gecikmeli bir şekilde ilerler ve 48-72 saat sonra alerjenin enjeksiyon bölgesinde kızarıklık, şişme ve bazen infiltrasyon (pozitif reaksiyon) görülür. Vücut duyarlı değilse, intradermal uygulama vücutta herhangi bir reaksiyona (negatif reaksiyon) neden olmaz. Endüstri, cilt alerjisi testleri için özel müstahzarlar üretir: tüberkülin, dizenterin, brusellin, tularin, vb.

Alerjik yöntem özellikle büyük önem bulaşıcı bir hastalığa neden olan ajanın tanımlanmasının zor veya imkansız olduğu durumlarda (örneğin, cüzzam ile) veya bunun uzun zaman aldığı durumlarda (örneğin, bruselloz ile). Tüberkülin testi pratikte sadece tanı amaçlı değil, aynı zamanda BCG aşısı olan çocukların yeniden aşılanma zamanlamasını belirlemek ve ayrıca toplu anti-tüberküloz bağışıklığını incelemek için kullanılır.

Alerji yönteminin avantajları - sadeliği, güvenilirliği, ifadesi.

dezavantaj - sınırlı kullanım, çünkü tüm bulaşıcı hastalıklar gecikmiş tipte aşırı duyarlılık geliştirmez.

TANIDA SEROLOJİK REAKSİYONLAR

BULAŞICI HASTALIKLAR

Günümüzde, bulaşıcı ve bulaşıcı olmayan hastalıkların laboratuvar teşhisi için immünolojik araştırma yöntemleri yaygın olarak kullanılmaktadır.

Antijenler ve antikorlar arasındaki etkileşim reaksiyonlarına serolojik (serum - serum, logolar - öğrenme) denir.

Tüm serolojik reaksiyonların özü, antijenlerin spesifik kombinasyonundan ve bunlara karşılık gelen antikorlardan bir kompleks oluşumundan oluşur. Ana bileşenler - antijenler ve antikorlar - immünolojik bir yazışma (homoloji) varsa serolojik bir reaksiyon mümkündür. İmmünolojik özgüllük, antijen ve antikorun yapısal tamamlayıcılığına dayanır.

Antijenlerin ve antikorların etkileşim süreci, spesifik ve spesifik olmayan iki aşamada ilerler. İlk aşama hızla gelişiyor. Antikorun aktif merkezinin, karşılık gelen (homolog) antijenin belirleyici grupları ile spesifik bir bağlantısından oluşur. Sonraki aşama daha yavaş gelişir, spesifik olmayan dışa dönük tezahür antijen-antikor reaksiyonları (flokülasyon, bulanıklık, vb.)

Serolojik testler iki amaç için kullanılır:

1) bilinen antijenleri (serodiagnostikler) kullanarak çalışılan serumdaki antikorları saptamak için;

2) bilinen serumları kullanarak bilinmeyen bir antijen oluşturmak (sero-identifikasyon).

Mikrobiyolojik çalışmalarda bilinmeyen bir antijenin tespiti, özneden izole edilen patojenlerin jenerik, tür, tiplerini belirlemek için yapılır. Bu gibi durumlarda, reaksiyonun iki ana bileşeninden (antikor, antijen) antijen bilinmez; reaksiyon, bilinen antikorlarla gerçekleştirilmelidir. Bu durumda antijen, test materyalinden izole edilen saf bir mikroorganizma kültürüdür. İmmün tanı serumları bilinen antikorlar olarak kullanılır. Sonuncusu, daha önce karşılık gelen bakteriyel antijenlerle immünize edilmiş hayvanların (çoğunlukla tavşanların) kanından elde edilir. Bağışıklık serumu içermelidir yüksek seviye spesifik antikorlar.

Ek olarak, çeşitli bakteriyel olmayan antijenleri belirlemek için serolojik testler kullanılabilir: kan gruplarını, doku antijenlerini, tümörleri belirlemek, organ ve doku nakli için donör-alıcı çiftlerini seçmek vb.

Kan serumundaki antikorları saptamak için serolojik testler de kullanılabilir. Bu gibi durumlarda bilinen bir antijen (diagnosticum) gereklidir. Canlı veya öldürülmüş mikropların süspansiyonları, ekstraktları veya bunlardan izole edilmiş kimyasal fraksiyonlar antijen olarak kullanılabilir.

Halihazırda halk sağlığı pratiğinde kullanılan çok sayıda serolojik test, antijen-antikor ilişkisi fenomeninde farklılık göstermektedir. Reaksiyonun görünen tezahürü, hangi tekniğin kullanıldığına, antijen veya immün serumun hangi fiziksel durumda kullanıldığına, reaksiyonda kompleman olup olmadığına bağlı olarak farklı olacaktır. Örneğin, bir korpüsküler antijen kullanılırsa, aglütinasyon fenomeni meydana gelir - partiküllerin yapışması (aglütinasyon reaksiyonu). Partikül antijenleri nispeten büyük partiküllerden oluştuğundan, gözle görülür bir pıhtılaşmış çökelti oluşur. Reaksiyonda çözünür bir antijen kullanılırsa, ince taneli bir çökeltinin çökelmesi gözlemlenir (çökelme reaksiyonu). Kompleman, bakteriyel antijenlerin ve immün serumun etkileşiminin reaksiyonuna dahil edilirse, bakteriyoliz (bakteriyel antijenlerin çözünmesi) veya eritrositlerin parçalanması (antijen olarak kullanıldıklarında) meydana gelir. Florokromlar, enzimler veya radyoizotoplarla etiketlenmiş immün serumların serolojik reaksiyonlarında kullanılması, karşılık gelen fenomene (lüminesans, renk değişikliği veya bir radyoizotop etiketinin aktivitesi) göre antijenlerin antikorlara spesifik bağlanmasını belirlemeyi mümkün kılar.

Serolojik yanıtları değerlendirmek için özgüllük ve duyarlılık gibi kriterler kullanılır. Özgüllük, antijenlerin yalnızca homolog antikorlarla reaksiyona girme yeteneğidir. Duyarlılık, minimum miktarda antijen ve antikor ile spesifik etkileşim yeteneğidir.

aglütinasyon reaksiyonu

Aglütinasyon reaksiyonu (RA), antijenlerin, serum antikorlarının etkisi altında antijenlerin yapışmasında ve bir elektrolit varlığında çökelmelerinde eksprese edilen antikorlarla spesifik bir etkileşimidir. Önerilen serolojik reaksiyonların ilkiydi.

Aglütinasyon reaksiyonunun özelliği, hücrelerin veya diğer korpüsküler partiküllerin, ayarlanması sırasında antijen olarak kullanılmasıdır. Reaksiyon, korpüsküler antijenlerin, taneler, pullar, topaklar şeklinde bir çökelti oluşturmak için immün serumun homolog antikorlarına spesifik olarak bağlanma yeteneğine dayanır. Reaksiyon sadece elektrolitlerin varlığında gerçekleşir. Reaksiyonda kullanılan antijenlere aglütinojenler, antikorlara aglutininler ve oluşan çökeltiye aglutinat denir.

İzotonik sodyum klorür çözeltisi içinde canlı kültürlerin bir süspansiyonu veya formalin, alkol veya ısıtma ile öldürülen mikropların yanı sıra eritrositler, lökositler veya diğer hücreler, aglütinasyon reaksiyonunda bir antijen olarak kullanılabilir.

Antikorların kaynağı, hayvanları uygun antijenlerle bağışıklaştırarak elde edilen bilinen aglütinasyon serumu veya incelenen hastanın serumudur.

Var olmak Farklı yollar aglütinasyon reaksiyonunun ayarlanması. Bunlardan en yaygın kullanılanları: cam üzerinde oryantasyon reaksiyonu, test tüplerinde genişletilmiş aglütinasyon, hemaglütinasyon ve dolaylı hemaglütinasyon reaksiyonları (RNGA).

Benzer bilgiler.

Serolojik araştırma (testler) — laboratuvar yöntemleri hastanın biyolojik materyalindeki antikorların veya antijenlerin saptanmasına dayanan çalışmalar. Çoğu zaman, analiz için kan kullanılır, daha az sıklıkla idrar, tükürük, pürülan akıntı veya biyopsi sırasında alınan doku örnekleri kullanılır.

Uygulama alanı

• Kan grubunun belirlenmesi.
• Spesifik tümör proteinlerinin tanımlanması - tümör belirteçleri (örneğin, yumurtalık kanseri, prostat kanseri şüphesi durumunda, Mesane, mide vb.)
• Viral, bakteriyel, fungal, protozoal enfeksiyonların teşhisi (HIV, sifiliz, toksoplazmoz, klamidya, kızamıkçık, herpes, helmintiyaz, kene kaynaklı ensefalit, vb.).
• İncelenen biyomateryalde bulunan hormonların, enzimlerin ve ilaçların küçük konsantrasyonlarda (10-10 g / l'den az) belirlenmesi.

Yöntemin özü serolojik testlerdir.

Serolojik testler tekniklerinde farklılık gösterir, ancak hepsi antijenlerin (yabancı bileşikler) karşılık gelen antikorlarla etkileşiminin sonucudur. Çalışma birbirini takip eden iki aşamadan oluşmaktadır. İlk faz, antijenler ve antikorlar arasındaki etkileşim ile immün komplekslerin oluşumu (pozitif reaksiyon) ile karakterize edilir. İkinci aşamada, bu çok komplekslerin varlığını doğrulayan dış işaretler belirir (reaksiyonun türüne bağlı olarak, bu, test çözeltisinin bulanıklığı, renginde bir değişiklik, pul kaybı vb. olabilir). Görünür fiziksel olayların olmaması, olumsuz bir test sonucu olarak kabul edilir.

Serolojik testler için hazırlık

Çalışmanın türüne bağlıdır. Bir tıp uzmanı, prosedür için randevu alırken belirli bir testi geçmenin özelliklerini anlatmalıdır.

Gerekli serolojik testi Spectra kliniğinde yapabilirsiniz. Hızlı ve güvenilir sonuçların garantisi olan Avrupa standartlarına göre çalışan en iyi metropol laboratuvarlarında analizler sipariş ediyoruz. Doktorlarımız, sonucu deşifre etmeye ve daha fazla teşhis için önerilerde bulunmaya yardımcı olacaktır.

SEROLOJİK ARAŞTIRMA(Latin serum serumu + Yunan logos doktrini) - serolojik reaksiyonlar kullanarak antijenleri veya antikorları tanımlamak için insan veya hayvan kanının spesifik özelliklerini inceleyen immünoloji yöntemleri.

S.'nin başlangıcı ve. geçen yüzyılın sonunda, bir antijenin bir antikorla bağlantısının (bkz. Antijen - antikor reaksiyonu) görsel gözlem için mevcut bir dizi fenomene eşlik ettiği bulunduktan sonra - aglütinasyon (bakınız), çökelme (bakınız) veya liziz. Bu bileşenlerden biri biliniyorsa, antijenlerin (bakınız) veya antikorların (bakınız) spesifik olarak tanınması olasılığı vardır.

1897'de F. Vidal, tifolu hastaların kan serumunun seçici olarak tifo bakterilerini aglutine ettiğini ve bu nedenle bu reaksiyonun (bkz. Vidal'in reaksiyonu) laboratuvar için kullanılabileceğini bildirdi. tifo ateşinin teşhisi. Aynı yıl, veba, tifo ve kolera bakterisi kültürlerinin filtratlarının, karşılık gelen bağışıklık serumları ile birleştiğinde pullar oluşturduğu veya çökeldiği gösterildi.

Çökeltme reaksiyonunun, herhangi bir protein antijeninin saptanması için uygun olduğu kanıtlanmıştır. 1900-1901'de. K. Landsteiner, insanların eritrositlerinde iki farklı antijen (A ve B) olduğunu ve kan serumunda kan gruplarını belirlemek için hemaglütinasyon reaksiyonunun kullanımına katkıda bulunan iki aglutinin (a ve P) olduğunu buldu (bkz.) .

Kan grubunu ve Rh faktörünü belirlemek için aglütinasyon reaksiyonu, obstetrik uygulamada, kan transfüzyonlarında ve doku naklinde kullanılır. Rh faktörüne karşı antikorlar (bkz.) eksik antikorlardır, Rh-pozitif eritrositlerle doğrudan reaksiyona giremezler, bu nedenle onları tespit etmek için, eksik tespite dayanarak Coombs reaksiyonu kullanılır (bkz. Coombs reaksiyonu). antiglobulin serumları kullanılarak antikorlar. Spesifikliği bilinen eritrositlere test kan serumu eklenir, ardından IgG'ye karşı antiglobulin serumu (dolaylı Coombs reaksiyonu) eklenir. Çalışılan kan serumunun eksik antikorlarının Fab fragmanları, eritrositlere bağlanır ve anti-IgG antikorları, bu antikorların serbest Fc fragmanlarına bağlanır ve eritrositler aglütine olur. Hemolitik anemiyi teşhis etmek için doğrudan bir Coombs reaksiyonu kullanılır.Bu tür hastaların vücudunda eritrositler, kanda dolaşan Rh faktörüne karşı antikorlarla birleştirilir. Bunları tanımlamak için hastadan alınan eritrositlere IgG'ye karşı antikorlar eklenir. Eritrosit aglütinasyonunun ortaya çıkması hastalığın tanısını doğrular.

Hemaglütinasyonun inhibisyonunun reaksiyonu - RTGA (bkz. Hemaglütinasyon) - eritrositlerin virüsler tarafından hemaglutinasyonunun immün serumu tarafından önleme (inhibisyon) fenomenine dayanır. Viral hemaglütinasyon fenomeni serol değildir. reaksiyon ve virüsün eritrosit reseptörleri ile bağlanması sonucu oluşur, ancak RTGA, antiviral antikorları tespit etmek ve titre etmek için kullanılan serolojik bir reaksiyondur. RTGA, etken maddeleri hemaglütinasyon özelliklerine sahip olan influenza, kızamık, kızamıkçık, kabakulak, kene kaynaklı ensefalit ve diğer viral enfeksiyonların serodiagnozu için ana yöntemdir.

Pasif veya dolaylı hemaglütinasyonun reaksiyonu, yüzeyinde antijenlerin (bakteriyel, viral, doku) veya antikorların emildiği eritrositler veya nötr sentetik kimya (örneğin lateks parçacıkları) kullanır (bkz. Boyden'in reaksiyonu). Aglütinasyonları, uygun serum veya antijenler eklendiğinde meydana gelir. Antijenlerle duyarlı hale getirilen eritrositler, antijenik eritrosit teşhisi olarak adlandırılır ve antikorları saptamak ve titre etmek için kullanılır. Antikorlar tarafından duyarlı hale getirilen eritrositler, immünoglobulin eritrosit tanıları olarak adlandırılır (bkz.) ve antijenleri saptamak için kullanılır:

Pasif hemaglütinasyon reaksiyonu, bakterilerin (tifo ve paratifoid ateş, dizanteri, bruselloz, veba, kolera vb.), protozoa (sıtma) ve virüslerin (grip, adenovirüs enfeksiyonları, kene kaynaklı ensefalit, Kırım hemorajik ateşi) neden olduğu hastalıkları teşhis etmek için kullanılır. , vb.) ... Pasif hemaglutinasyonun duyarlılıktaki reaksiyonu, virüsü arenovirüs hastalıklarında (bakınız), özellikle lenfositik koriomenenjitte izole etme yönteminden daha düşük değildir. Lenfositik koriomenenjitin viral antijeni, on binlerce kez seyreltilmiş ekstrakte edilmiş organların süspansiyonları ile pasif bir hemaglütinasyon reaksiyonunda virüs taşıyıcılarında (ev fareleri) tespit edilir. Pasif hemaglütinasyon reaksiyonunda salmonelloz ile, bakteriler 1 g dışkıda birkaç yüz mikrobiyal cisim konsantrasyonunda belirlenir, dizanteri bakterileri Gıda Ürünleri 1 g malzeme en az 500 mikrobiyal cisim içerdiğinde tespit edilir.

Pasif hemaglütinasyon reaksiyonu, viral hepatit B'nin teşhisinde ve önlenmesinde kullanılır. Sovyetler Birliği'nde, akut hepatit B'li hastaların kanındaki HBs antijenini (bkz. Avustralya antijeni) tespit etmek için, tavuk eritrositleri olan bir teşhis yapılır. HBs antijenine karşı keçi immünoglobulini ile duyarlı hale getirilmiştir. Bir damla diagnostik, incelenen kişilerin eşit hacimdeki kan serumu ile birleştirilir ve içinde HBs antijeni varsa, aglütinasyon meydana gelir. Reaksiyon, 1.5 ng/ml'ye kadar HBs antijeni yakalayabilir. HBs antikorlarını tespit etmek için hastaların kanından izole edilmiş, üzerlerine emdirilmiş HBs antijenli eritrositler kullanılır. Pasif hemaglütinasyon reaksiyonu ayrıca hastanın ilaçlara ve hormonlara, örneğin penisilin veya insüline karşı aşırı duyarlılığını belirlemek için kullanılır. Bu durumda, insan kan grubu 0'ın eritrositleri bir ilaçla hassaslaştırılır ve daha sonra hastanın kan serumundaki aglutininleri saptamak için kullanılır.

Pasif hemaglütinasyon reaksiyonu, gebelik oluşturmak için idrarda gonadotropik hormonu tespit etmek için kullanılır (bkz. Koryonik gonadotropin). Bunun için incelenecek idrarla birlikte bu hormon için standart bir serum inkübe edilir. Üzerine emilen hormon ile eritrositlerin daha sonra eklenmesiyle, idrarda bulunan hormon, aglütinasyon antikorlarını nötralize ettiğinden, aglütinasyon meydana gelmez (pozitif yanıt).

Yağış Olgusuna Dayalı Reaksiyonlar

Çok çeşitli antijenleri ve antikorları tespit etmek için kullanılırlar. Niteliksel bir reaksiyonun en basit örneği, bir test tüpünde antijen-antikor birikimi sınırında opak bir çökeltme bandının oluşmasıdır. Yarı sıvı agar veya agaroz jellerde çeşitli tiplerde çökeltme reaksiyonları yaygın olarak kullanılmaktadır (Ouchterlon'a göre çift immünodifüzyon yöntemi, radyal immünodifüzyon yöntemi, immünoelektroforez), to-çavdar hem kalitatif hem de kantitatiftir (bkz. İmmünodiffüzyon, İmmünoelektroforez).

Çift immünodifüzyon kurmak için, bir cam plaka üzerine bir erimiş jel tabakası dökülür ve sertleştikten sonra 1.5-3 mm çapında kuyular kesilir. Test antijenleri bir daire içinde bulunan kuyucuklara yerleştirilir ve bilinen spesifikliğe sahip bağışıklık serumu merkezi kuyuya yerleştirilir. Homolog serumlar ve antijenler birbirine doğru difüze olarak bir çökelti oluşturur. Radyal immünodifüzyonla (Mancini yöntemiyle), agar'a immün serum eklenir. Kuyucuklara yerleştirilen antijen agar içinden difüze olur ve immun serum ile çökelme sonucunda kuyuların çevresinde dış çapı antijen konsantrasyonu ile orantılı olan opak halkalar oluşur. Bu reaksiyonun bir modifikasyonu, IgM ve IgG antikorlarını tanımak için influenza tanısında kullanılır (bakınız İmmünoglobulinler). Agara influenza antijeni eklenir ve kuyucuklara kan serumu eklenir. Daha sonra plakalar, karşılık gelen antikorların antijenlerle reaksiyonunu tanımlamaya yardımcı olan IgM veya IgG antikorlarına karşı bağışıklık serumu ile tedavi edilir. Yöntem, antikor titrelerini ve bunların belirli bir immünoglobulin sınıfına ait olduklarını aynı anda belirlemenizi sağlar.

Bir tür immünoelektroforez, radyoimmünoforezdir. Bu durumda, antijenlerin jel içindeki hareketine paralel olarak kesilen oluk içine elektroforetik olarak ayrıldıktan sonra, önce belirlenen antijenlere karşı radyoaktif iyot etiketli immün serum ve ardından IgG antikorlarına karşı immün serum, oluşan antikorun kenarlarına dökülür. -antijen kompleksleri çökelir. Tüm bağlanmamış reaktifler yıkanır ve antijen-antikor kompleksi otoradyografi ile saptanır (bkz.).

Kompleman içeren reaksiyonlar. Kompleman içeren reaksiyonlar (bakınız), tamamlayıcı alt bileşen Cl'nin (Clq) ve ardından diğer tamamlayıcı bileşenlerin immün komplekslere bağlanma yeteneğine dayanır.

Kompleman fiksasyon reaksiyonu, bir antijen-antikor kompleksi tarafından kompleman fiksasyonu derecesine göre antijenlerin veya antikorların titre edilmesini sağlar. Bu reaksiyon iki aşamadan oluşur: antijenin test edilen kan serumu ile etkileşimi (test sistemi) ve hemolitik serumun koyun eritrositleri ile etkileşimi (gösterge sistemi). Reaksiyon pozitifse, test sisteminde kompleman bağlanır ve daha sonra antikorları duyarlılaştırılmış eritrositleri eklerken, hemoliz gözlenmez (bkz. Kompleman Bağlanma Reaksiyonu). Reaksiyon, viseral sifilizin (bkz. Wasserman reaksiyonu) ve viral enfeksiyonların (bakınız Virolojik çalışmalar) serodiagnozu için yaygın olarak kullanılır.

Sitoliz. Hücresel yapılara karşı antikorlar, tamamlayıcının katılımıyla bu yapıları taşıyan hücreleri çözebilir. Eritrosit lizizi, hemoglobin salınımının derecesi ve yoğunluğu ile kolayca değerlendirilebilir. Nükleer hücrelerin parçalanması, metilen mavisi ile boyanmayan ölü hücrelerin yüzdesi hesaplanarak değerlendirilir. Hücrelere önceden kimyasal olarak bağlanan radyoaktif krom da sıklıkla kullanılır. Yok edilen hücrelerin sayısı, hücre lizizi sırasında salınan bağlanmamış krom miktarı ile belirlenir.

Eritrositlerin radyal hemoliz reaksiyonu bir jelde meydana gelebilir. Bir ram eritrosit süspansiyonu, tamamlayıcı eklenmiş bir agaroz jele yerleştirilir; cam üzerinde dondurulan tabakada delikler açılır ve içlerine hemolitik serum verilir. Antikorların radyal difüzyonunun bir sonucu olarak kuyuların çevresinde bir hemoliz bölgesi oluşacaktır. Hemoliz bölgesinin yarıçapı, serum titresi ile doğru orantılıdır. Eritrositler üzerinde herhangi bir antijen emerseniz, örneğin grip virüsünün glikoproteini hemaglutinin, kızamıkçık veya kene kaynaklı ensefalit, hemoliz fenomenini bu virüslere karşı bağışıklık serumları ile çoğaltabilirsiniz. Jeldeki radyal hemoliz reaksiyonu, sertleşmenin basitliği, serum inhibitörlerine karşı duyarsızlığı ve seri seyreltmelere başvurmadan hemoliz bölgesinin çapı boyunca kan serumunu titre edebilme yeteneği nedeniyle viral enfeksiyonların tanısında uygulama bulmuştur.

Bağışıklık yapışması. Kırmızı kan hücreleri, trombositler ve diğer kan hücrelerinin yüzeyinde tamamlayıcının üçüncü bileşeni (C3) için reseptörler bulunur. Antijene (bakteriler, virüsler, vb.) Karşılık gelen bağışıklık serumu ve tamamlayıcı eklenirse, tamamlayıcının C3 bileşeni ile kaplanmış bir antijen-antikor kompleksi oluşur. Komplemanın C3 bileşeni sayesinde trombositlerle karıştırıldığında antijen-antikor kompleksi hücrelere yerleşecek ve aglütine olmalarına neden olacaktır (bkz. Bağışıklık yapışması). Bu reaksiyon, HLA sisteminin antijenlerini belirlemek için kullanılır (bakınız Nakil bağışıklığı) ve bir dizi çalışmada viral enfeksiyonlar(kene kaynaklı ensefalit, dang humması), to-çavdar hastalığına immünopatol eşlik eder. antikorlarla kombinasyon halinde kandaki viral antijenlerin süreçleri ve dolaşımı.

Nötralizasyon reaksiyonu, antikorların, örneğin enzim aktivitesi, bakteriyel toksinler, virüslerin patojenitesi gibi makromoleküler veya çözünür antijenlerin belirli spesifik fonksiyonlarını nötralize etme yeteneğine dayanır. Bakteriyolojide bu reaksiyon, antistreptolisinleri, antistreptokinazları ve antistafilizinleri saptamak için kullanılır. Toksinlerin nötralizasyon reaksiyonu biyol ile değerlendirilebilir. etki, bu nedenle, örneğin, antitetanoz ve antibotulinik serumları titre edin (bkz. Toksin - antitoksin reaksiyonu). Hayvanlara enjekte edilen toksin ve antiserum karışımı ölümlerini engeller. Çeşitli seçenekler Virolojide nötralizasyon reaksiyonları kullanılır. Virüslerin uygun bir antiserum ile karıştırılması ve bu karışımın hayvanlara veya hücre kültürlerine verilmesi ile virüslerin patojenitesi nötralize edilir.

Kimyasal ve fiziksel etiketleri kullanan reaksiyonlar

A. N. Coons tarafından 1942'de geliştirilen immünofloresan, serol için kullanılır. florokrom ile işaretlenmiş serum reaksiyonları (bkz. İmmünofloresan). Florokrom ile etiketlenen serum, antijen ile bir antijen-antikor kompleksi oluşturur, to-ry, florokrom parıltısını uyaran ultraviyole ışınlarında mikroskop altında gözlem için uygun hale gelir. Doğrudan immünofloresan reaksiyonu, hücresel antijenleri incelemek, enfekte hücrelerde virüsü tespit etmek ve yaymalarda bakteri ve riketsiyayı tespit etmek için kullanılır. Bu nedenle kuduz teşhisi için virüs taşıdığından şüphelenilen hayvanların beyin parçalarının izleri ışıldayan kuduz serumu ile tedavi edilir. Olumlu bir sonuçla, sinir hücrelerinin protoplazmasında parlak yeşil renkte topaklar gözlenir. İnfluenza, parainfluenza ve adenovirüs enfeksiyonunun ekspres teşhisi, nazal mukozadan imprint hücrelerinde viral antijenlerin tespitine dayanır.

Dolaylı immünofloresan yöntemi, IgG antikorlarına karşı ışıldayan immün serum kullanılarak bir antijen-antikor kompleksinin saptanmasına dayanarak daha yaygın olarak kullanılır ve yalnızca antijenleri değil, aynı zamanda antikorları titre etmek için de kullanılır. Yöntem, uçuk, sitomegalip ve Lassa ateşinin serodiagnostiğinde uygulama bulmuştur. Laboratuvarda, antijen içeren hücre preparatları stoğu -20 ° C'de saklanmalıdır, örneğin, ince cam parçalar üzerinde büyütülmüş ve bir virüsle enfekte olmuş VERO hücreleri veya asetonla sabitlenmiş tavuk fibroblastları. Test kan serumu müstahzarların üzerine katmanlanır, müstahzar f 37°'de bir termostata yerleştirilerek bağışıklık kompleksleri oluşturulur ve daha sonra bağlanmamış reaktifler yıkandıktan sonra bu kompleksler insan globülinlerine karşı etiketli lüminesan serum ile tespit edilir. IgM veya IgG antikorlarına karşı etiketlenmiş immün serumları kullanarak, antikor tipini ayırt etmek ve IgM antikorlarının varlığı ile erken bir immün yanıtı tespit etmek mümkündür.

Enzim - immünolojik yöntemde, enzimlerle konjuge antikorlar kullanılır, Ch. arr. yaban turpu peroksidaz veya alkalin fosfataz. Etiketli serumun antijenle bileşimini saptamak için, sarı-kahverengi (peroksidaz) veya sarı-yeşil (fosfataz) renginde seruma eklenen bir enzim tarafından ayrıştırılan bir substrat eklenir. Ayrıca sadece kromojenik değil, aynı zamanda lumojenik substratı da parçalayan enzimler kullanırlar. Bu durumda, olumlu bir reaksiyonla bir parıltı belirir. İmmünofloresan gibi, enzimatik yöntem, hücrelerdeki antijenleri saptamak veya antijen içeren hücreler üzerindeki antikorları titre etmek için kullanılır.

En popüler enzim immünolojik yöntem türü immünosorpsiyondur. Selüloz, poliakrilamid, dekstran ve çeşitli plastikler olabilen katı bir taşıyıcı üzerinde antijeni emerler. Çoğu zaman, taşıyıcı mikropanel kuyularının yüzeyidir. Test kan serumu, emilmiş antijen, ardından enzim etiketli antiserum ve substrat ile kuyulara eklenir. Sıvı ortamın rengindeki değişiklik ile olumlu sonuçlar dikkate alınır. Antijenleri saptamak için antikorlar taşıyıcıya emilir, ardından test materyali kuyulara verilir ve reaksiyon, enzim etiketli bir antimikrobiyal serum ile geliştirilir.

Radyoimmünolojik yöntem, antijenlerin veya antikorların bir radyoizotop etiketinin kullanımına dayanır. Başlangıçta kanda dolaşan hormonların seviyesini ölçmek için özel bir yöntem olarak geliştirilmiştir. Test sistemi, izotop etiketli bir hormon (antijen) ve ona karşı bir antiserumdu. Böyle bir antiseruma istenen hormonu içeren bir materyal eklenirse, antikorların bir kısmını bağlayacaktır; etiketli titre edilmiş hormonun müteakip eklenmesiyle, kontrole kıyasla daha düşük bir miktarı antikorlara bağlanacaktır. Sonuç, bağlı ve bağlı olmayan radyoaktif etiketin eğrileri karşılaştırılarak değerlendirilir. Bu tür bir yönteme rekabetçi reaksiyon denir. Radyoimmünoassay yönteminin başka modifikasyonları da vardır. Radyoimmunoassay yöntemi, hormonların belirlenmesinde kullanılan antijen ve antikorların belirlenmesinde en hassas yöntemdir, tıbbi maddeler ve antibiyotikler, bakteriyel, viral, riketsiyal, protozoal hastalıkların teşhisi için, kan proteinlerinin, doku antijenlerinin incelenmesi.

Tıbbi uygulamada serolojik araştırma yöntemlerinin karşılaştırmalı özellikleri ve kullanımı

S.'nin yöntemleri ve. kullanım hassasiyetini ve çok yönlülüğünü artırma yönünde sürekli geliştirilmektedir. Başlangıçta serol. tanı, antikorların saptanmasına dayanıyordu. 20. yüzyılın ortalarında gelişiyle. daha hassas olan immünofloresan ve pasif hemaglütinasyon reaksiyonları, sadece antikorları değil, aynı zamanda antijeni doğrudan hastalardan materyalde tespit etmek mümkün hale geldi. Duyarlılığı immünofloresan ve pasif hemaglütinasyondan 2-3 kat daha yüksek olan enzim-immünolojik ve radyoimmünolojik yöntemler, biyol yöntemlerine yaklaşır. bakteri ve virüslerin tespiti. Hem antijenlerin hem de antikorların tespiti için uygulamalarının kapsamı teorik olarak sınırsızdır.

Serodiagnostik enf. hastalıklar, patojenin hastalıkta tespit edilip edilmediğine bakılmaksızın, izole edilmiş veya şüphelenilen bir patojene karşı antikorların ortaya çıkmasına dayanır. akut evre hastalık. Hastalığın başlangıcında ve 2-3 haftada alınan kan serumu çiftlerini inceleyin. sonra. İkinci kan serumundaki antikorlarda birinciye kıyasla en az 4 kat artış teşhis açısından önemlidir. Ayrıca immünoglobulin antikorlarının hangi sınıfla temsil edildiği de önemlidir. IgM antikorları, hastalığın akut döneminin sonunda ve erken aşama nekahat dönemi. IgG antikorları, nekahat döneminin daha sonraki bir aşamasında ortaya çıkar ve uzun süre dolaşımda kalır. Hamileliğin ilk üç ayında bir kadının kızamıkçık virüsüne karşı IgM antikorlarına sahip olduğu tespit edilirse, bu, hamileliğin sonlandırılmasının temelidir, çünkü bu dönemde fetüs özellikle virüse karşı hassastır. Farklı inf. hastalıklar, seçici olarak en spesifik ve uygun yöntemleri kullanırlar.

Kum. epidemiyolojide yaygın olarak kullanılmaktadır. Kan örneklerinin sistematik olarak toplanması ve incelenmesi farklı gruplar popülasyon, popülasyonun patojenlerin kaynağı ile temaslarını anlamayı sağlar. hastalıklar. Sürü bağışıklığı seviyesinin incelenmesi, enfeksiyonların coğrafi yayılımını incelemek için yüksek riskli grupları belirlemeyi ve aşılama faaliyetlerini planlamayı mümkün kılar. Kum. çeşitli yaş gruplarıörneğin popülasyon, belirli zaman dilimlerinde influenza virüsünün farklı varyantlarının dolaşımını geriye dönük olarak tanımlamayı mümkün kıldı.

Kum. kalıtsal hastalıkların (bkz.) ve otoimmün hastalıkların çalışmasında, ilgili hedef hücreleri yok eden doku ve organa özgü antikorların ortaya çıkması ve ayrıca tümör antijenlerinin tespiti için onkolojide büyük önem taşır. Bu nedenle karaciğer kanserinin immün tanısı, hastaların kan serumunda alfa-fetoprotein ve diğer embriyonik antijenlerin immünodifüzyon ve radyoimmünolojik yöntemlerle belirlenmesine dayanır.

Serol kullanımı sayesinde hücresel antijenlerin, bakteri ve virüslerin antijenlerinin ince antijenik yapısının araştırılmasında önemli bilimsel ilerleme sağlanmıştır. monoklonal antikorların reaksiyonları, to-çavdar antijenin belirleyicilerini ayırmak için elde edilebilir.

Kaynakça:İmmünolojide Araştırma Yöntemleri, ed. I. Lefkovits ve B. Pernis, çev. English., M., 1981'den; İmmünoloji Kılavuzu, ed. O.E. Vyazov ve Sh.X. Khodzhaeva, M., 1973; Klinik kılavuzlar laboratuvar teşhisi, ed. V.V. Menshikov, M., 1982; İmmünoloji, ed. tarafından J.-F. Bach, N.Y., 1978.

S. Ya. Gaidamovich.